TP test ELISA Immunologie

1651 mots 7 pages
Compte rendu d'immunologie
Révélation et quantification d'anticorps anti-BSA dans un sérum de lapin par un test ELISA.

Introduction

Au cour de ce TP nous avons voulu titrer le sérum d'un lapin à l'aide d'un test ELISA. En d'autres termes nous cherchons à quantifier le nombre d'anticorps anti-BSA ( Albumine Sérique Bovine) produit par un lapin ayant été immunisé contre la BSA. Pour ce faire nous allons comparer les résultats obtenus entre différents tests ELISA : un se faisant avec un serum de lapin non immunisé, un sérum de lapin immunisé contre la BSA et différentes fractions obtenues après une chromatographie d'affinité a la BSA.

Le test ELISA repose sur l'affinité d'un anticorps spécifique à son antigène. Dans le cas présent il s'agit d'un anticorps de lapin anti-BSA et de son antigène la BSA. Notre BSA tapissant le puits d'une plaque expérimentale, l'anticorps anti-BSA se fixe à la protéine. On utilise ensuite un anticorps secondaire anti-anticorps de lapin qui va se fixer à l'anticorps primaire (anti-BSA). Celui ci a été préalablement couplé a une enzyme phosphatase alcaline. Après ajout du substrat, l'enzyme va hydrolyser celui ci en un produit. Ce produit va alors colorer le puits nous permettant de mesurer l'absorbance. De plus plusieurs anticorps secondaires vont pouvoir se fixer a l'anticorps anti-BSA ce qui nous permettra d'amplifier le signal.

Méthode

Au cour de ce test, il est important de laver notre plaque ELISA entre chaque étapes avec du PBS-Tween afin d'éliminer toutes les interactions non spécifiques qui peuvent se former entre les différentes proteines et anticorps dans les puits. Ce lavage permet d'enlever le surplus des solution ajouté et tout ce qui ne ce serait pas fixer au puits (directement ou indirectement).
La première étape de cette expérience consiste à déposer notre solution de BSA dans les puits de la plaque maxisorb (ce type de plaque est réalisée pour ancrer les protéines aux parois des puits).
Pour les

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