Compte rendu TPActivité auxine-oxydasique in vitroLe Goff LucieLe Noac’h EmmanuelleL2 BCMP Groupe 3B But et principe de la manipulation : Dans les tissus végétaux, in vivo , l' AIA est dégradé par oxydation. Ces réactions d'oxydation du catabolisme de l'auxine sont catalysées par l'auxine oxydase. On veut montrer l'activité de cette enzyme in vitro , en fonction de la quantité d' AIA disparue au cours du temps d'une …afficher plus de contenu…

Puis on fera un cinétique enzymatique à partir d'échantillons contenant de l'auxine et de l'auxine oxydase, entre autres, ayant subi des temps d'incubation différents.Gamme étalon • Solution mère d' AIA à 125mg.L−1 •25mL de solution fille d' AIA à 50µg.mL−1 = 50mg.L−1 Manipulation : • Tableau de gamme :Tubes0 1 2 3 4 5 AIA 50µg.mL−1 (mL) 0,0 (0µg) 0,2 (10µg) 0,4 (20µg) 0,6 (30µg) 0,8 (40µg)1,0 (50µg) H2Oqsp(mL) 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 3mL de Salkowski(s) t = 0 t = 30 t = 60 t = 90 t = 120 t = 150 DO(540nm) 0,000 0,086 0,119 0,223 0,289 0,345 Droite étalon01020304050600,0051,00,1520,,0253,0035,0,4Quantité d'AIA …afficher plus de contenu…

« Blanc ». ◦ T1 . Témoin sans activité enzymatique car sans extrait enzymatique. ◦ E1 et E2 . Échantillons.· Tableau de cinétique :TubesT0 T1 E1 E2T0 T1 E1 E2 Incubation (mn)0 1 2 3 Lecture des DO Prélèvement de1mL pourintroduire dans3mL deSalkowski (mn) 15 16 17 18 21 22 23 24 30 31 32 33 36 37 38 39 45 46 47 48 51 52 53 54 60 61 62 63 66 67 68 69 · Lecture des DO :t (mn) 21 36 51 66 DO (T0) (540nm) 0 0 0 0 t (mn) 22 37 52 67 DO (T1) (540nm) 0,358 0,340 0,312 0,305 Quantité d' AIA(µg) 51,8 49,3 45,2 44,2 t (mn) 23 38 53 68 DO(E1)(540nm) 0,342 0,330 0,128 0,105 Quantité d' AIA(µg) 49,6 48,0 18,6 15,2 t (mn) 24 39 54 69 DO(E2)(540nm) 0,338 0,297 0,113 0,092 Quantité d' AIA(µg) 49,0 43,0 16,4 13,3 On prend les données du tube E2 pour tracer la courbe de quantité d' AIA dans le tube en fonction du temps.Tube E2Temps de cinétique (mn)Quantité d' AIA (µg) 0 x 15 49,0 30 43,0 45 16,4 60 13,3 Mais il faut