Tp d'histologie coupes qu microtome
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P HISTOLOGIE Préparation des coupes histologiques:
Avant de procéder à la découpe, nous devons faire une observation macroscopique de notre bloc.
Pour ma part mon bloc paraissait homogène, l’organe avait certainement dû bouger, j’avais une petite bulle d’air au sommet de mon bloc, il ne s’était pas trop creusé car j’ai fait un beau ménisque saillant.
Maintenant, nous allons avant de commencer à découper au microtome, couper notre bloc en biseau autour de l’organe, puis fixer un manche porte-bloc en le faisant chauffer au bec bunsen. On le tient dans la main et on le fixera sur la partie plate du bloc, il doit monter à une température de 40°C environ lorsque nous n’arrivons plus à le tenir tellement qu’il est chaud. A ce moment là, on le pose verticalement sur le bloc jusqu'à ce qu’il tienne. Puis on le met au réfrigérateur pour le refroidir.
Pour découper nos tranches fines d’organe, nous allons nous servir d’un Microtome manuel, fait en fonte. Cet appareil permet d’obtenir de fines tranches de matière. Le microtome est constitué d’une partie fixe : la lame de rasoir et d’une partie mobile : la crémaillère qui peut s’avancer ou se reculer en fonction de la place que prend le bloc pour pouvoir être coupé par la lame de rasoir, la crémaillère est composée d’une roue crantée et d’une bielle. Pour que cela marche nous devons entendre un bruit, plus il est fort, plus la roue avance vite, et plus les tranches sont fines. Pour faire tourner la roue, on a une manivelle dont le sens de rotation n’a aucune importante pour qu’il puisse s’adapter aux droitiers comme aux gauchers.
Apres avoir placé notre manche sur le bloc et de l’avoir passé au réfrigérateur, nous le plaçons dans une encoche de façon a bien le fixer, qu’il soit positionné de façon à être perpendiculaire à la lame. Nous pouvons commencer à découper la paraffine, on doit couper beaucoup de tranche de paraffine avant d’atteindre la pièce, cela s’appelle un dégrossissage.
Des que l’on a atteint