Dosage du lactose du lait par la méthode au DNS

1. Préparation de l’échantillon:

Introduire dans une fiole jaugée à 100 mL: – 2 mL de lait UHT – 1 mL d'acide trichloracétique (3 mol/L) – Laisser reposer 10 minutes – Neutraliser avec 6 mL de NaOH (1 mol/L) – Compléter et ajuster avec de l'eau distillée.
Filtrer pour obtenir le filtrat L

2. Dosage des sucres réducteurs par colorimétrie au DNS:

Les glucides réducteurs peuvent être dosés grâce à leurs propriétés réductrices, en milieu alcalin et à chaud, vis-à-vis de l'acide 3-5 dinitrosalicylique (3,5-DNS). La réaction est non stœchiométrique, donc dépendante des conditions opératoires. Par conséquent on opérera par référence à une gamme d'étalonnage. Le 3,5-DNS jaune est réduit en acide 3-amino-5-nitrosalicylique orangé-rouge, dosable par colorimétrie à 530 nm.

Le développement de la coloration à 100 °C et les mesures d'absorbance devront être menés simultanément pour les essais et les étalons.

2.1.Méthodes générales de préparation des solutions colorées

Dans un tube à essais, verser: ▪ v mL de solution apportant les sucres à doser ▪ qsp 3 mL d'eau distillée ▪ 2 mL de réactif au 3,5-DNS

– Boucher les tubes et les porter au bain-marie à 100°C pendant 5 min exactement. – Refroidir sous un courant d'eau froide (ou dans un bain d'eau froide). – Ajouter 15 mL d'eau distillée. – Mesurer les absorbances à 530 nm contre un blanc.

2.2.Préparation de la gamme d'étalonnage :

– Préparer par pesée 100 mL de solution étalon de lactose monohydraté à 2 g/L. – Préparer une gamme d'étalonnage de 6 tubes contenant de 0 à 2 mg de lactose monohydraté par tube à partir de la solution étalon réalisée.

2.3. Traitement des échantillons :

Doser les sucres réducteurs sur les échantillons L, sur d'éventuelles dilutions (pour cela se référer à la