A

Pages: 47 (11997 mots) Publié le: 8 juin 2015
Amélie BARON
2ème année DUT chimie
Année 2014

Institut National de Recherche Agronomique
Unité de Recherches Avicoles
Equipe Fonction & Régulation des Protéines de l’œuf
Maître de stage : Dr Sophie Réhault-Godbert

Sommaire
Avant-Propos --------------------------------------------------------- P4

I Introduction-------------------------------------------------------- P5
I.1.L’œuf et sespropriétés------------------------------------- P5
I.1.A. Généralités---------------------------------------------------------- P5
I.1.B. Formation de l’œuf-------------------------------------------------P5
I.1.C. L’œuf, une ressource riche en protéines------------------------ P7

I. 2. L’ovalbumin-Related-Protein-X------------------------ P8
I.2.A. L’OVAX et l’Ovalbumine : deux moléculesapparentées----- P8
I.2.B. Propriétés de l’OVAX ---------------------------------------------- P9
I.2.C. Variabilité génétique de l’OVAX et production de variants
recombinants------------------------------------------------------------- P10

II Matériels et Méthodes----------------------------------- P14
II.1. Purification des recombinants de l’OVAX-----

P14

II.1.A. Préparation préliminaire des solutionstampons----------- P14
II.1.B. Purification par chromatographie d’exclusion HR100 -----P15
II.1.C. Purification par chromatographie d’échange d’anions (QSépharose)----------------------------------------------------------------- P17
II.1.D. Purification par chromatographie d’affinité (héparine
sépharose)----------------------------------------------------------------- P19

2

II.2. Analyse parélectrophorèse SDS-PAG

--------- P21

II.3.Analyse par Western-Blot----------------------------- P27
IIIRésultats / Discussion------------------------------------ P30
III.1. Purification de l’OVAX à partir du blanc
d’œuf-------------------------------------------------------------------- P30
III.2. Purification des clones par chromatographied’exclusion------------------------------------------------------------- P31
III.3. Purification par chromatographie ionique--- P33
III.4. Purification par chromatographie d’affinité à
l’héparine--------------------------------------------------------------- P36

Conclusion-------------------------------------------------------------- P38
Remerciements ----------------------------------------------------- P39Lexique------------------------------------------------------------------ P40
Abréviations-----------------------------------------------------------P43
Bibliographie & Sitographie---------------------------------- P44
Constantes physico-chimiques ------------------------------ P45
Phrase de Risque -------------------------------------------------- P46
Phrase de Sécurité----------------------------------------------- P47

3

Avant-Propos
L’institutNational de Recherche Agronomique, fondée en 1946, est un centre de
recherche qui étudie trois domaines étroitement liés : l’alimentation, l’agriculture et
l’environnement. En effet, les besoins en nourritures étant liés à la population mondiale en
croissance constante, et à nos conditions de vie, il est primordial de comprendre et de
trouver des solutions afin d’allier, de manière compatible etdurable, la production et la
protection de notre environnement.
L’INRA compte19centres de recherche répartis sur toute la France, chacun spécialisé
dans des domaines divers. Le centre INRA de Tours Val de Loire a, lui, été créé en 1966. Il
est réparti sur 2 sites, le site de Nouzilly et le site d’Orléans. Le site de Nouzilly comporte
trois unités de recherches et trois unités expérimentales. Sesrecherches portent sur
l’animal, sa santé, sa biologie et la santé publique.
C’est au sein de l’Unité de Recherches Avicoles, composée de 4 équipes de
recherches, rattachées aux départements de Physiologie Animale et Système d’Elevage
(PHASE), et Génétique Animale que l’on retrouve l’équipe« Fonction et Régulation des
Protéines de l’œuf », à laquelle j’ai été rattachée durant ma période de...
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