L'orthonitrophénol
L'absorbance d'une substance est une grandeur physique, sans unité, notée A, qui caractérise l’aptitude de la substance à absorber le rayonnement, c’est-à-dire qui permet de mesurer la proportion de rayonnement absorbé. L’absorbance est mesurable à l’aide d’un appareil appelé le spectrophotomètre.
Pour une solution d’une espèce chimique X colorée « suffisamment diluée », l’absorbance A de cette espèce est proportionnelle à [X], concentration de l’espèce colorée pour une longueur d’onde donnée λ0 du rayonnement et pour une longueur l donnée de solution traversée :
A = [X] * l * ε (Loi de Beer-Lambert )
Où A est sans unité ;
[X] est exprimée en mol.L-1 ε, un coefficient qui dépend de l’espèce X et de la longueur d’onde λ0 qui est alors exprimé en mol.L-1 l, le trajet optique en cm
L’orthonitrophénol (oNP-OH) est un composé phénolique qui comporte un groupement nitro (NO2) en position ortho sur le cycle benzénique.
En milieu alcalin, la fonction alcool (-OH) est facilement déprotonée et la molécule d’orthinotrophénol (ONP-OH) est convertie en ion orthonitrophénolate (oNPO-) ; ion dont la solution est fortement colorée en jaune et présente un maximum d’absorption à 420 nm. Ce changement de coloration est très utile pour les suivis spectrophotométriques.
La spectrophotométrie est une méthode extrêmement courante qui consiste à mesurer l’absorbance d’une substance chimique donnée, généralement en solution. Plus l'échantillon est concentré, plus il absorbe la lumière dans les limites de proportionnalité énoncées par la loi de Beer-Lambert.
La densité optique des échantillons est déterminée par un spectrophotomètre préalablement étalonné sur la longueur d'onde (λ) d'absorption de la substance à étudier.
Le but de