Coefficient d'extinction

683 | 16,397 | Légende : Discussion Annexe Exemple de calcul : * Calcul de la concentration molaire (mol/L) en DCPIP réduit par minute : c=Aℇ×l= -0,00841,62×104×1=5,185×10-7 mol/l.min * Absorbance (DO) * ℇ : coefficient d’extinction molaire (1,62x104 M-1cm-1 à 600nm) * C : concentration molaire (mole/l) * L : largeur de la cuvette à spectrophotomètre (1cm) * Transformer la quantité de DCPIP réduit de mol/l.min en µmol/l.min : c1=5,185×10-7 ×106=5

collecteur, on peut calculer la concentration en albumine dans la solution de départ par des méthodes graphiques, car l’absorbance est proportionnelle à la concentration, comme on peut le voir dans la relation : A= ε × l ×c, avec A= absorbance, ε= coefficient d’extinction molaire, et c la concentration. Pour pouvoir mesurer l’absorbance, on a rajouté du biuret dans les tubes dont on veut calculer la concentration. En effet, le biuret est une molécule composée de CuSO4, EDTA disodique et de KCl. Elle se

415nm | 0.523 | 0.534 | 0.544 | 0.554 | 0.563 | 0.572 | 0.580 | | Graphique (annexe 1) Calculs D’après la loi de Beer-Lambert A = ε . l . C Avec A : Absorbance (sans unité) ε : coefficient d’extinction molaire (en L.mol-1.cm-1) l : longueur de la cuve (en cm) C : concentration de la solution (en mol/L) Alors sachant que dans notre situation on détermine l’absorbance du 2-NitroPhénol (OPN) à 415nm afin de connaître la concentration

soluté est de 215 g.mol-1.Le solvant n'absorbe pas à 470 nm. Déterminer le coefficient d’extinction molaire et spécifique. Exercice 4 : On étudie l'absorption de la lumière par une solution renfermant deux composés A et B.Leurs masses molaires sont respectivement MA = 200 g mol-1 et MB = 400 g mol-1.Dans la solution la concentration en composé A est de 0,05 g L-1 et celle en B est de 0,06 g L-1 Les coefficients d'extinction molaire sont : pour A :  = 500 mol-1.L.cm-1 , :  = 1000 mol-1.L.cm-1 pour

couplé à une solution d’iode en fonction de la concentration en mol par litre de l’amidon. Droite croissante dont l’ordonnée à l’origine est égale à 0 : On peut donc appliquer à nos mesures la relation de Beer-Lambert. Le coefficient d’extinction molaire représente alors le coefficient directeur de la droite. Réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH : Tube 1 : Permet de déterminer le zéro du spectrophotomètre afin de ne pas fausser toutes les mesures suivantes : C’est un contrôle. Tube

TECHNOLOGIES BIOCHIMIQUES ET BIOLOGIQUES TRAVAUX PRATIQUES SUJET 21 Durée : 7 heures Coefficient : 9 BIOCHIMIE (8 points) Durée : 3 heures DETERMINATION DES CONSTANTES CINETIQUES KM et Vmax D’UNE ENZYME L’enzyme étudiée est la phosphatase alcaline. On utilise la cinétique d’hydrolyse du PNPP (paranitrophényl phosphate) à 30°C et à pH = 9,8. PNPP + H2O ----------------- PNP + Phosphate Le PNP (paranitrophénol) jaune en milieu alcalin est dosé par photométrie d’absorption

1.2) Loi de Beer-Lambert Elle permet de déterminer A grâce à la relation empirique suivante : A = ! (")!C C : concentration ( mol.L-1 ) dans un solvant non absorbant ou dont l’absorption est compensée. ! : coefficient d’extinction molaire du soluté. ! : longueur de la cuve (cm). ! dépend de la substance absorbante, de la longueur d’onde du faisceau ! et de la température. La loi de Beer-Lambert est une loi limite, valable si la solution est diluée et si on se place à

mol.m-3) est la concentration de la substance absorbante (en m) est la longueur du trajet optique (ici l=1cm) est le coefficient d’extinction molaire de la substance absorbante en solution Obtention de : L’absorbance et la concentration sont liés par une relation de proportionnalité. Nous avons donc utilisé la concentration en Ce4+ à t=0 et l’absorbance à t=0 pour obtenir ce coefficient. L’absorbance à t=0 est A=2.891. On obtient =149,5 L.mol-1.cm-1. Ceci nous amène donc à la concentration en X :

ultraviolets. Les absorbances déterminé sont directement proportionnel aux concentrations grâce à la loi de Beer-Lambert. Nous allons déterminer le coefficient de proportionnalité grâce à une droite d’étalonnage. Résultats et discussion : Grâce aux données du tableau 1, on trace une droite d’étalonnage nous permettant de trouver le coefficient d’extinction spécifique : ε. Pour l’UVITEX à 374 nm ε = 0,1165mg/L. Cela nous permet de passer de valeurs en absorbance à valeurs de concentration. Le tableau

est énoncée par ma loi de Beer-Lambert : la transmission du REM à travers une solution est T = I/I0. Cependant c’est la densité (DO) ou absorbance qui est proportionnelle à la concentration de la molécule. DO = log(1/T) = (LC ( est le coefficient d’extinction molaire, caractéristique de la substance, à la longueur d’onde choisie L est le trajet optique, généralement égal à 1cm C est la concentration de la substance à doser Préparation des tampons Tampon d'équilibration de volume final 250