Cytochrome c

cellulaire et en mesurant l’activité succinate-cytochrome c réductase, in vitro, de la chaîne respiratoire. Pour cela on va extraire les mitochondries du parenchyme de pomme de terre par centrifugations différentielles, pour ensuite préparer une fraction mitochondriale nous donnant accès à la membrane interne, et par conséquent aux chaînes respiratoires. On va ainsi pouvoir étudier l’activité succinate-cytochrome c réductase en mesurant le passage du cytochrome c de la forme oxydée à la forme réduite à

en évidence les réactions red-ox du métabolisme respiratoire, sur des fractions mitochondriales par spectrophotométrie. En conditions physiologiques, un cycle entre le cytochrome c réduit et oxydé existe: la quantité entre les deux formes de cytochrome reste constante. Cependant, en présence de cyanure, une accumulation de cytochrome c réduit apparaît. Introduction La mitochondrie (du grec mitos, "fil" et chondros,"grain") est un organite intracellulaire présent uniquement chez les cellules eucaryotes

Passage passif des petites molécules par la porine de la membrane externe Espace inter-membranaire • c’est un espace d’une épaisseur de 4 à 7 nm dense • il contient : • Des protons H+ : rôle dans la phosphorylation • Des molécules de cytochrome c : rôle dans l’apoptose • Des molécules inférieure à 10 KDa Membrane interne • C’est une bicouche lipidique de 5 à 6 nm • Organisation très différente de celle de la membrane externe • 80 % des protéines et 20 % des lipides • Riche en

chlorophylles, ≈50 caroténoïdes, des protéines liées au centre réactionnel, des cytochromes, des ferredoxines. • Le photosystème II (PS II): Riche en chlorophylles b (absorbe à 680 nm). Ce PS II permet: - la production d'O2 - la production d'un réducteur (comble le "trou électronique" du PS I) Ce photosystème comprend: des chlorophylles, des caroténoïdes, des protéines liées au centre réactionnel, des plastoquinones, des cytochromes. 2- La phase lumineuse dans la photosynthèse. 2-1- fonctionnement

par les photosystèmes : des complexes plurimoléculaire faits d’une antenne collectrice et d’un centre réactionnel, contenant tous deux les pigments photosynthétiques, dont la chlorophylle. Ces photosystèmes, au nombre de deux, sont reliés par les cytochromes (Hopkins, 2010). Ensembles, et avec l’ATP synthase, ces structures constituent la chaîne de transport des électrons (Hopkins, 2010). Cette chaine, après la capture des photons lumineux qui lui fournissent sont énergie par excitation de la chlorophylle

Oxydation : perte d’électrons / Réduction : gain d’électrons La chaine respiratoire : 4 complexes + 2 transporteurs mobiles d’électrons (Coenzyme Q, cytochrome c) + ATP synthase (F1 et F0). Complexe 1 : NADH déshydrogénase : NADH  NAD+ + H+ Complexe 2 : succinate déshydrogénase : succinate  fumarate. Complexe 3 : cytochrome b-c1 Complexe 4 : cytochrome c oxydase : ½ O2 + 2H+  2 H2O Le gradient électrique du aux réactions de la chaine respiratoire va être la source de production de l’ATP au niveau

membrane Δψ … et empoisonnement complexe I NADH-déshydrogénase ré-oxyde NADH en NAD+ transfert des e- au coenzyme Q site de pompage de H+ complexe IV/cytochromes a-a3 cytochrome c-oxydase ré-oxyde Cyt c réduit O2 en H2O site de pompage de H+ complaxe III/ cytochromes b-c1 cytochrome c-rédcutase ré-oxyde UQ site de pompage de H+ transfert des e- au cytochrome c ATP-synthétase complexe V/complexe F0-F1/ ATPase/ATPosome → enzyme de phosphorylation de l'ADP en ATP → tableau diapo 32

CHROMATOGRAPHIE D'EXCLUSION SUR GEL DE SEPHADEX INTRODUCTION : On se propose au cours de ce TP de séparer un mélange de deux macromolécules protéiques de masses moléculaires différentes (SAB et cytochrome c ) par méthode de chromatographie d'exclusion sur gel séphadex (G50) en déterminant les caractéristiques de notre colonne par exclusion grâce au dextran bleu , de vérifier ensuite notre séparation par spectrométrie et de doser par méthode de Lowry et al nos fraction obtenue .

qui permet l’oxydation du dihydrochlorure de tetraméthyl-p- phénylènediamine. Ce dernier est un réactif utilisé pour déceler la présence de l’enzyme oxydase dans une bactérie. S’il y a présence de cytochrome c oxydase à l’intérieur de celle-ci, alors une coloration violette s’en suit. Le cytochrome oxydase a la capacité de réduire le dioxygène. 5 MOBILITÉ ! Le test de mobilité permet de détecter la présence de flagelles chez une bactérie. Ce test s’effectue dans un milieu semi-liquide

Stettler voie intracellulaire A) voie mitochondriale de l’activation des caspases: • Procaspases-9 activée par des signaux proapototiques mitochondriaux ⇓ • formation de l’apoptosome = complexe protéique cytoplasmique sous l’influence du cytochrome C relargué par la mitochondrie PIFO-2004-O.Stettler voie intracellulaire B) formation de l’apoptosome et activation: • Cyt C + dATP ⇒ chgt de conformation de Apaf-1 ⇒ heptamérisation de Apaf-1 • association homophilique procaspase-9/