Déshydrogénase

Lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d'affinité La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme présente dans une grande diversité d'organismes, aussi bien végétaux qu'animaux. Elle catalyse la conversion réciproque de la pyruvate et de la lactate accompagnée de la conversion concomitante du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de 4 sous unité (isoenzyme) différents de par leurs constance cinétiques et leurs pH isoélectriques. Le but de ce TP

cours du temps. La chaîne respiratoire est localisée dans la membrane interne mitochondriale. Cette chaîne de transport d'électrons est constituée de 4 complexes enzymatiques : • complexe • complexe • complexe • complexe I : NADH déshydrogénase II : succinate déshydrogénase III : cytochrome b-c1 IV : cytochrome c oxydase. 1 2 3 II - Résultats : 1. Tracés 1 et 2 : Pour ces 2 expériences, nous avons exploité les résultats d’un autre groupe car nos expériences personnelles n’ont pas

1. But du TP L’objectif de ce TP est de purifier une solution contenant de nombreuses protéines afin de récolter l’enzyme lactate déshydrogénase et déterminer son activité spécifique. 2. Principe La lactate déshydrogénase (LDH) est l’enzyme catalysant la réaction : L-lactate + NAD+ Pyruvate + NADH + H+ Elle existe sous 5 formes rmes d’isoenzymes qui différent par leur pH isoélectrique. ➢ Chromatographie d’affinité Afin de la purifier un extrait de tissu fœtal bovin contenant

Lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d'affinité La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme présente dans une grande diversité d'organismes, aussi bien végétaux qu'animaux. Elle catalyse la conversion réciproque de la pyruvate et de la lactate accompagnée de la conversion concomitante du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de 4 sous unité (isoenzyme) différents de par leurs constance cinétiques et leurs pH isoélectriques. Le but de ce TP

glycolyse (comme dans le muscle) il est d'abord oxydé en pyruvate sous l'action de la lactate déshydrogénase. On obtient la réaction suivante : CH3-CHOH-COO- + NAD+ ¬¾® CH3-CO-COO- + NADH,H+ Le pyruvate est ensuite oxydé en acétyl-CoA. Cette réaction est catalyse par le complexe multi-enzymatique de la pyruvate déshydrogénase (complexe PDH) constitué de 3 enzymes principales. La pyruvate déshydrogénase (Enzyme E1), ayant la thiamine pyrophosphate (TPP) comme groupement prosthétique assure la décarboxylation

de 4 points sur 40 Une patiente souffre d’hépatite C non traitée ainsi que de troubles cardiaques. Le médecin lui prescrit un ensemble d’analyses comprenant entre autre un dosage de l’albumine et une détermination de l’activité de la lactate déshydrogénase. 1. Dosage colorimétrique de la serumalbumine par le vert de bromocresol : 26 points 1.1. Principe : L'albumine-Kit permet le dosage colorimétrique de la sérumalbumine. A pH 4.2, l'albumine se combine au vert de bromocrésol pour former un complexe

COMPTE RENDU N°1, ENZYMOLOGIE : La lactate déshydrogénase, purification partielle par chromatographie d’affinité But : Purifier la lactate déshydrogénase. Nous disposons d’un extrait de tissu bovin fœtal. Purification partielle sur gel de bleu de Cibacron et mesure de l’activité enzymatique 1ère étape : Vérifier la présence de l’enzyme dans notre tissu. Réaction d’oxydation du lactate (dans les mitochondries) : Lactate + NAD + Pyruvate + NADH,H+ Si notre

(transformation). b) Cofacteurs : Pour que la réact° est lieu il ft des cofacteurs qui se fixent ds le site actif pr améliorer la réaction. Exemple :  la Créatine Phosphokinase (CPK) présente ds les muscles, le cœur et le cerveau,  La Lactate Déshydrogénase (LDH) ds le cœur, les muscles et l’erythrocyte. 2) Les facteurs : a) Les facteurs endogènes :  La température : une température optimale, càd où la vitesse de la réact° chimiq augmente, existe pour l’activité enzymatique. L’intervalle se

fait intervenir, dans le cas de ladécarboxylation oxydative du pyruvate, un complexe multienzymatique appelé complexe pyruvate déshydrogénase. Ce dernier, semblable aucomplexe alpha-cétoglutarate déshydrogénase qui conduit à la succinyl-coenzyme A, est composé de trois enzymes : la pyruvate déshydrogénase, la dihydrolipoamide S-acétyltransférase, la dihydrolipoyl déshydrogénase, avec cinq cofacteurs : la thiamine pyrophosphate (TPP), la lipoamide /dihydrolipoamide, la coenzyme A (CoA-SH), la flavine

rendu TP : La lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d’affinité Différentes entreprise utilisent de nombreuses protéines dans divers domaines tels que la cosmétiques, la production de facteurs de croissance, l’agronomie... A l’origine une protéine n’est jamais seul dans l’organisme dont elle est produite, d’où la nécessité de pouvoir la purifier selon diverses méthodes plus ou moins similaire. Nous allons nous intéresser ici à la lactate déshydrogénase (LDH) qui est une