Determination Du Site Actif D Un Peptide

TP de BSF1 : DETERMINATION DU SITE ACTIF D’UN PEPTIDE SYNTHETIQUE PAR HPLC  Année 2011/2012 BUT : Le but de ce TP est de déterminer la localisation, dans un peptide, du site d’interaction avec un glycosaminoglycane naturel : l’Héparine. Pour cela, on utilisera une méthode d’analyse et de purification : la chromatographie en phase inversée avec appariement d’ions en HPLC. PRINCIPE : * Chromatographie en phase inversée avec appariement d’ions : Dans la chromatographie en phase inversée

ADCs  Liaison de l’Ac à l’antigène  Internalisation dans un puits recouvert de clathrine ou un raft lipidique  Libération de la drogue dans les lysosomes  La drogue rejoint sa cible pharmacologique ou quitte la cellule par un processus actif ou passif 3 Avantages des ADCs  Augmenter l’efficacité de l’anticorps monoclonal « Des essais préliminaires n’avaient pas permis d’observer une activité clinique significative du brentuximab seul » (Inca novembre 2010)  Ne pas toucher

Détermination du site actif d’un peptide synthétique par HPLC : IBut : Ce TP va nous permettre de localiser la zone d’interaction d’un peptide synthétique avec l’héparine en analysant le peptide digéré ou non dans une colonne de HPLC puis en déterminant la capacité du peptide digéré avec l’héparine grâce à une chromatographie d’affinité. II- Principes : 1) Chromatographie en phase inversée avec appariement d’ions : Cette chromatographie a une phase stationnaire composé de Silice à laquelle

Détermination du site actif d’un peptide synthétique par HPLC But : Préciser la localisation dans un peptide synthétique de la zone impliquée dans son interaction avec un glycosaminoglycane naturel : l’héparine. Vous allez expérimenter une méthode d’analyse et de purification incontournable, la chromatographie en phase inversée et vous familiariser avec l’HPLC. Vous devrez comprendre ses caractéristiques (principe), ses intérêts et défauts. La bonne connaissance des propriétés des peptides et

25 3.1. AMINOACIDES SUBISSANT UNE MODIFICATION POST-TRADUCTIONNELLE .................................. 25 3.2. AUTRES AMINOACIDES .......................................................................................................... 26 LES PEPTIDES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 4.1. 4.1.1. LA LIAISON PEPTIDIQUE .....................

couche mince Ph. Collas – UCO Bretagne Nord 18 Biochimie structurale Lipides • Chromatographie en phase gazeuse (demandant une dérivation préalable, mais de loin la mieux adaptée aux lipides). Ph. Collas – UCO Bretagne Nord 19 Peptides. Acides aminés. COOH HC α NH 2 R Formule générale. Le carbone portant la fonction carboxylique acide est dit "0", donc le car- bone suivant est le carbone α. Il porte la fonction amine NH2. Ce sont donc des acides α aminés. On trouve en

couche mince Ph. Collas – UCO Bretagne Nord 18 Biochimie structurale Lipides • Chromatographie en phase gazeuse (demandant une dérivation préalable, mais de loin la mieux adaptée aux lipides). Ph. Collas – UCO Bretagne Nord 19 Peptides. Acides aminés. Formule générale. COOH HC α NH 2 R Le carbone portant la fonction carboxylique acide est dit "0", donc le car- bone suivant est le carbone α. Il porte la fonction amine NH2. Ce sont donc des acides α aminés. On trouve

les domaines de la biochimie et de la biologie cellulaire et par la même occasion d’acquérir une première expérience. L’étude de mon stage porte sur l’analyse du plasma de rats ayant reçu des injections de peptides actifs et l’étude de l’effet des peptides sur la composition protéique au site d’injection sous l’influence d’un stress physique stimulé. Le stress est un syndrome d’adaptation de l’organisme aux perturbations. Réponse non spécifique que donne le corps à toute demande qui lui est faite

AMINOACIDES SUBISSANT UNE MODIFICATION POST-TRADUCTIONNELLE .................................. 25 3.2. AUTRES AMINOACIDES .......................................................................................................... 26 LES PEPTIDES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 4.1. 4.1.1. LA LIAISON PEPTIDIQUE .................

CH2OH a- Appartient à la série L b- Est actif sur la lumière polarisée. c- Peut être obtenu par réduction d’un aldose D ou L d- Peut être obtenu par réduction d’un cétose.