Électrophorèse sur gel d'agarose

plusieurs fragments d’ADN de tailles différentes. 2- Digestion d’un plasmide (pBluescript) avec Eco R1 et Hind III. Vous allez cloner les fragments de l’étape 1 dans ce plasmide. 3- Inactivation des enzymes de restriction. 4- Analyse par électrophorèse sur gel d'agarose des fragments d’ADN produits pendant les digestions 1 et 2. 5- Ligation des fragments produits dans l’étape 1 dans le plasmide, utilisant une ligase (une « colle moléculaire »). 6- Introduction des molécules recombinantes produites pendant

afin d'obtenir des résultats cohérents qui pourront être analysés et commentés par la suite. De nombreux tests ont été réalisées pendant les manipulations pour confirmer la présence de l'insert ou du vecteur à ces moments précis, notamment des électrophorèses. Nous allons donc détailler dans ce paragraphe les étapes précises de l'expérience. PCR (polymerase chain reaction) Pour réaliser l'amplification, le milieu réactionnel doit contenir 1µL de plasmide pJET contenant l'insert, 0,4 µL

tubes de réaction en suivant le protocole et ceux-ci ont été placés pour 45 minutes à 37°C dans le bloc chauffant. SOP-BIO-5 – Électrophorèse d’ADN sur un gel d’agarose. (Les fragments PCR et digestions d’endonucléases) Quelques changements ont été apportés. Nous avons utilisé une source de tension réglée à 130V pour accélérer le processus de migration de l’ADN dans le gel pendant un total de 47min. Le reste des manipulations a été effectué conformément aux indications du protocole. Résultats Les

dans de l'eau. Une électrophorèse sur gel d'agarose a été faite pour comparer les ARNs obtenus.  Suivie de l’évolution dans le temps de la différenciation des iPS en cellules différenciées : Nous avons fait dans un premier temps synthétiser de l’ADN à partir de notre ARN pour cela nous avons utilisé des randoms primers et nous avons ensuite effectué une PCR en utilisant certains oligos afin d’amplifier les zones voulues (RT-PCR). Enfin nous avons effectué une électrophorèse pour vérifier la

est prioritaire, récessif ; caractère qui ne s'exprime pas. Nous devrons donc savoir si le gène DMD (gène responsable de la dystrophie musculaire de Duchenne) est dominant et récessif afin de déterminer si c'est héréditaire. L'électrophorèse par gel permet de séprarer en plusieurs niveaux des brins d'ADN afin de mieux pouvoir les observer. Nous allons également introduire la notion de myopathie de Duchenne (ou DMD pour dystrophie musculaire de Duchenne). La myopathie de Duchenne est une maladie

2nd F Électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose Introduction Les multiples applications scientifiques et technologiques impliquant l'étude de l'ADN font appel à différentes techniques. Parmi elles, l’électrophorèse sur gel d’agarose ou de polyacrylamide est une des plus communément utilisées car elle permet de séparer des molécules en fonction de leur taille, préalable indispensable dans de multiples applications, notamment pour identifier des fragments d’ADN découpés par des enzymes, pour identifier

sont faisables, ce qui va donner des centaines de milliers d'exemplaires du plasmide. C'est le principe du clonage. Résultats: A la suite de notre premier clonage une première électrophorèse sur gel d'agarose a été réalisé. En parallèle de la migration des fragments d'adn, un marqueur et introduit dans électrophorèse afin de déterminer la taille des fragments obtenus à l'issue de la digestion. Pour le plasmide on retrouve les taches a la bonnes taille, on voit une dizaine de taches Pour ce qui

TATGCCCTAGGCTCGAGAGCTAGCAGACGTCTTT- 5’ 5’ ATACGGGATCCGAGCTCTCGATCGTCTGCAGAAATTCC 3’ En rose, séquence obtenue après élongation Exercice 3 L'ADN d’un cosmide recombinant* de 48,6 kpb a été hydrolysé par l'enzyme de restriction Sal I. Cet ADN est analysé par électrophorèse sur gel d’agarose (pistes 2 et 4). Un marqueur de taille (l'ADN du phage lambda hydrolysé par l'enzyme de restriction Hind III ) est déposé dans les puits 1 et 3. Ce marqueur de taille est un mélange équimolaire de fragments d’ADN de tailles connues. La

TP Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative I. But : Ce TP a pour but d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’un culot d’E.coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par

travers d'un gel. Le principe consiste à soumettre un mélange de molécules à un champ électrique ce qui entraine la migration des molécules chargées. En fonction de différents paramètres (charge, masse, forme, nature du support, conditions physico-chimiques) la vitesse de migration va être variable, ce qui permet la séparation des différentes molécules. Expérience: En milieu basique, les molécules d'ADN sont chargées négativement. Soumises à un champ électrique, elles migrent, dans un gel conducteur