Électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium

CH3-CO-COO- + NADH + H+  CH3-CHOH-COO- + NAD+. Cette réaction est centrale dans le fonctionnement du métabolisme énergétique de la cellule puisque le pyruvate est le pivot qui relie la glycolyse et le cycle de l'acide citrique (cycle de Krebs). En présence d'oxygène, le pyruvate pourra entrer dans cette dernière voie métabolique mais, en condition anaérobique, il s'accumulera sous forme de lactate. Il n'est donc pas surprenant que les cellules, dépendant du tissu dont elles font partie (sujet ou non

Compte rendu TP électrophorèse de protéines électrotransfert et immunorévélation I) But du TP Lors du premier TP, nous avions essayé de purifier une protéine du blanc d’œuf, le lysozyme, par chromatographie échangeuse d’ions. Dans ce TP, nous allons vérifier cette purification à l’aide d’une électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Puis afin d’identifier précisément l’enzyme nous effectuerons un électro-transfert suivi d’une immunorévélation. II) Principe A°) Electrophorèse L’électrophorèse

basée sur la mesure de l'activité de la β-amylase totale dans l'orge. La β-amylase hydrolyse les liaisons α 1 4 des chaînes d'amidon à partir de leur extrémité non réductrice en libérant du maltose ; l'activité β-amylasique est inhibée par la présence d'ions Ca2+. Dans le grain d'orge une partie de la β-amylase est "insoluble" car liée aux granules d'amidon, l'autre partie est "libre" car localisée entre les granules d'amidon. Les étapes de l'extraction de la β-amylase TOTALE et de la mesure

afin de déterminer le rendement de la purification ; et par dosage des protéines à l'aide de la méthode de Bradford, pour calculer le facteur de la purification) et de manière qualitative (grâce a deux tests qualitatifs et une électrophorèse sur gel de polyacrylamide-SDS). Chromatographie sur colonne de DEAE sépharose Afin de purifier partiellement la β-galactosidase de l'extrait bactérien (extrait B), on réalise une chromatographie sur résine échangeuse d'ions. Ce type de chromatographie

1. Principe général et grandeurs fondamentales La séparation des composés par électrophorèse capillaire résulte de deux mécanismes de transport, l’électromigration et l’électroosmose. 1.1 Électromigration L’électromigration résulte du déplacement d’une espèce chargée lorsqu’elle est soumise à un champ électrique. La vitesse linéaire acquise (ou vitesse électrophorétique) est alors fonction du champ électrique et de la mobilité électrophorétique de l’ion selon la relation suivante : vep

des années 1970. Sommaire  [masquer]  * 1 Relation avec les autres sciences biologiques « à l'échelle moléculaire » * 2 Techniques de biologie moléculaire * 2.1 Clonage d'expressions * 2.2 Réaction en chaîne par polymérase * 2.3 Électrophorèse * 2.4 Southern blot * 2.5 Northern blot * 2.6 Western blot * 2.7 Puce à ADN * 2.8 Technologie abandonnée * 2.9 Histoire * 3 Liste de quelques biologistes moléculaires connus * 4 Notes et références * 5 Voir

l’albumine sérique de bovin (BSA) et une protéine inconnue Y à déterminer. Une première manipulation consistera à faire migrer par électrophorèse, de la BSA, des isoLDH, des protéines inconnues Y et un marqueur de taille, tous monomères, sur un gel de migration dénaturant SDS. La deuxième manipulation consistera quant à elle à faire migrer, toujours par électrophorèse, des isoLDH et de la BSA natives sous forme de polymères sur des gels de migration non dénaturants ND à différents pourcentages d’acrylamide

(QSépharose)----------------------------------------------------------------- P17 II.1.D. Purification par chromatographie d’affinité (héparine sépharose)----------------------------------------------------------------- P19 2 II.2. Analyse par électrophorèse SDS-PAG --------- P21 II.3.Analyse par Western-Blot----------------------------- P27 IIIRésultats / Discussion------------------------------------ P30 III.1. Purification de l’OVAX à partir du blanc d’œuf--------------------------------------------------------------------

tableaux et des figures ii Résumé iii Introduction 1 Matériel et Méthodes 5 Résulats 9 Observations microscopiques des fractions 9 Fractionnement cellulaire, matériel biologique et dosage protéique des fractions 10 Cinétique enzymatique 11 Gel d’électrophorèse 14 Discussion 16 CONCLUSION 20 Références 21 Annexe 1 : CINÉTIQUE ENZYMATIQUE : EXEMPLE DE CALCUL POUR L’EXTRAPOLATION POUR LES DONNÉES DE vmax, km et ki AVEC LE GRAPHIQUE 2 (P.12) 18 Table des tableaux et des figures Tableau

figure 1.3.) 1.2. Spectrométrie d’absorption et d’émission atomique L’expérience montre que les atomes n’émettent un rayonnement que si on les soumet à une excitation. Celle-ci peut se réaliser par chauffage (ex. : flamme jaune en présence de chlorure de sodium) ou par l’action d’un champ électrique (ex. : décharge dans un gaz). Les spectres obtenus à partir des rayonnements ainsi provoqués sont des spectres de raies. Ils comportent un ensemble de fréquences, caractéristiques de chaque élément