Électrophorèse sur gel de polyacrylamide

........ 55 3. Techniques de biochimie...................................................................................... 57 A. Electrophorèse de protéines sur gel de polyacrylamide..................................... 57 1. Préparation des échantillons protéiques......................................................... 57 2. Préparation des gels de polyacrylamide et conditions de migration...............57 B. Electrotransfert de polypeptides sur membrane......................................

tableaux et des figures ii Résumé iii Introduction 1 Matériel et Méthodes 5 Résulats 9 Observations microscopiques des fractions 9 Fractionnement cellulaire, matériel biologique et dosage protéique des fractions 10 Cinétique enzymatique 11 Gel d’électrophorèse 14 Discussion 16 CONCLUSION 20 Références 21 Annexe 1 : CINÉTIQUE ENZYMATIQUE : EXEMPLE DE CALCUL POUR L’EXTRAPOLATION POUR LES DONNÉES DE vmax, km et ki AVEC LE GRAPHIQUE 2 (P.12) 18 Table des tableaux et des figures Tableau

digestions enzymatiques. Vous déposez ensuite vos produits de digestion sur un gel d'agarose à 1%. La photographie du gel obtenu après migration et coloration au BET correspond à la figure A. 19 1 2 3 4 5 6 7 Figure A : Profil de restriction de l'ADN plasmidique P digéré par différentes enzymes de restriction. Après digestion enzymation, les milieux de digestion sont déposés et séparés sur gel d'agarose 1%. Ils sont révélés à l'aide de bromure d'éthidium. Légende : puits

avec une étiquette His6 dans un vecteur pQE30. Diverses techniques nécessaires au sous-clonage seront abordées : PCR, digestion par des enzymes de restriction, séparation de fragments d’ADN sur gel d’agarose, culture de bactéries. La  SNAP sera purifiée par chromatographie d’affinité et analysée sur gel d’acrylamide par la méthode SDS-PAGE. Elle sera identifiée par des anticorps spécifiques (techniques de Western blot et d’ELISA). Concepts clefs et difficultés attendues : Distinguer techniques

la Lp(a) et la détermination du profil lipoprotéique du sérum humain, par électrophorèse sur gel d’agarose. Les lipoprotéines sont séparées en tampon de pH 7,5 puis colorées par une solution de noir Soudan. L’excès de colorant est éliminé en milieu alcoolique. Les profils électrophorétiques peuvent être analysés qualitativement et la densitométrie donne une quantification relative de chaque zone individualisée. Chaque gel d’agarose contenu dans le kit HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 est prévu pour l’analyse

Immunoglobuline (Domaine V) Pyruvate Kinase (Domaine 1) Pré-Albumine 49 Myoglobine (hélice α) Tétramère: Hémoglobine 50 51 Enroulements super hélicoïdaux : le Collagène 3 Hélices α 52 53 L’électrophorèse en gel de polyacrylamide, en présence de SDS 54 55 56 Spectres d’absorption des AA Aromatiques dans l’UV 57 CHAPITRE III: STRUCTURE FONCTION DES PEPTIDES ET PROTEINES 58 Protéolyse de la PréProInsuline NH2 Peptide signal A COOH A

lorsqu’on confirme un résultat obtenu en sérologie de routine, on utilise parfois un test dit Western blot (WB), qui est une modification du principe ElIsa énoncé plus haut. dans le test WB, les protéines d’un lysat viral sont séparées en électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PagE), ensuite transférées (« blotting ») vers une feuille de nitrocellulose ou de nylon. cette feuille, découpée en lanières, permettra de tester les sérums pour rechercher les anticorps contre les différentes protéines avec une

être fixés avec une ADN ligase qui attache les chaînes sucre-phosphate ensemble en faisant une liaison phosphodiester. On peut ainsi construire des molécules d'ADN. Electrophorèse d'ADN sur gel d'agarose C'est une méthode d'analyse et/ou de purification de l'ADN : des échantillons d'ADN sont mis déposés dans un gel d'agarose immergé dans un tampon (TAE ou TBE) et mis à migrer sous l'effet d'un champ électrique (l'ADN est un polyanion). L'ADN est visualisé en ajoutant du bromure d'éthiduim

fragments, puis ligation des fragments au vecteur de clonage choisi, ici généralement un dérivé du phage lambda. Cette étape est généralement effectuée sur gel ou par centrifugation sur un gradient de densité de sucrose ou de sel (NaCl). Alternativement, l’ADN peut être isolé sur gel. La fraction désirée est alors découpée et l’ADN est isolé directement du gel. Le but est de sélectionner la fraction d'ADN dont la taille des fragments sera optimale pour le clonage. (4) Encapsidation des phages recombinants

as permis de voir que notre chromatographie a bien fonctionnée puisqu’on retrouve uniquement de l’arginine dans l’éluat 2 qui correspond à la seconde élution. Nous aurions pu également séparer ces deux acides aminés par électrophorèse sur gel d’agarose ou de polyacrylamide puisque l’électrophorèse sépare en fonction de la taille et la charge des molécules. Or l’alanine et l’arginine on une taille et une charge différente.