Électrophorèse sur gel de polyacrylamide

fractions, acide, basique et neutre. La fraction neutre contient en plus les glucides solubles. La séparation fine se fait généralement par chromatographie (papier, basse ou haute pression, CCM,…). On utilise fréquemment l'électrophorèse (sur papier ou sur gel) pour analyser les acides aminés. Le support est placé dans une solution tamponnée (⇒ pH choisi convenablement) et soumis à un champ électrique. En fonction du pH et du champ, les AA migrent dans un sens, dans l'autre, ou restent au niveau du dépôt

acide, basique et neutre. La fraction neutre contient en plus les glucides solubles. La séparation fine se fait généralement par chromatographie (papier, basse ou haute pression, CCM,…). On utilise fréquemment l'électrophorèse (sur papier ou sur gel) pour analyser les acides aminés. Le support est placé dans une solution tamponnée (⇒ pH choisi convenablement) et soumis à un champ électrique. En fonction du pH et du champ, les AA migrent dans un sens, dans l'autre, ou restent au niveau du dépôt

la mise en évidence de la variabilité de la séquence nucléotidique de l’ADN génomique après digestion par des enzymes de restriction. Une multitude de fragments d’ADN de tailles variables est générée par digestion enzymatique, puis séparée sur gel d’agarose et transférée par capillarité sous forme dénaturée sur une membrane de nylon. Cette membrane est mise en contact avec une solution contenant un fragment d’ADN ou sonde qui permet de repérer, par hybridation moléculaire, des fragments

PHAGES, COSMIDES, YAC, BAC, VIRUS 13 I- Les vecteurs en génie génétique : l'ADN plasmidique II- L'ADN phagique III. Cosmides, YAC et BAC 13 17 20 Chapitre III: ENZYME DE RESTRICTION, ÉLECTROPHORÈSE, CARTE DE RESTRICTION 24 I. Enzymes de restriction II. L’électrophorèse sur gel III. Les enzymes utiles en génie génétique: 24 30 31 CHAPITRE IV: CLONAGE ET ÉTUDE DE L’ADN CLONÉ. I - Le clonage II - Les banques génomiques III - Les banques de cADN IV - L’étude de l’ADN

poly(dN) Chapitre 9 : 9.1 9.2 9.3 9.4 9.5 9.6 9.7 9.8 9.9 9.10 9.11 9.12 9.13 Caractérisation des acides nucléiques Principaux oligonucléotides Spectres UV des bases nucléiques Spectre UV des acides aminés Dosage des acides nucléiques Electrophorèse des acides nucléiques Sonde nucléique (définition) Hybridation d’une sonde Calcul de la Tm Southern blot Drépanocytose (anémie falciforme) Marquage : nick translation Marquage : random priming Marquage : terminal transferase 2006 - 2007

............................................................................................... 29 7.2 Préparation des échantillons .................................................................................................. 29 7.3 Dépôt sur gel ........................................................................................................................... 30 7.4 Transfert sur membrane ..............................................................................................

Techniques 3.1. Electrophorèse Technique qui permet d'observer l'ADN: On a un gel d'agarose ou de polyacrylamide. L'ADN va migrer en fonction de la charge: du pôle négatif au pôle positif (l'ADN étant chargé négativement). Si un ADN fait 1000 pb, il va migrer moins loin (et plus lentement) qu'un ADN qui fait 700 pb. NB: C'est la charge qui fait migrer l'ADN; mais la migration s'effectue en fonction du poids de la molécule d'ADN. 8 3.2. Séquençage de l'ADN Hybridation et électrophorèse sont les 2 concepts

réaction. Isoenzymes : enzymes catalysant la même réaction sur le même substrat, mais ayant des structures protéiques différentes. Exemple : la LDH tétramérique possède 2 types de protomères (H et M). Il en résulte 5 isoenzymes séparables par électrophorèse (H4, H3M, H2M2, H3 et M4) La répartition des isoenzymes varie en fonction des organes (H domine dans le cœur, M dans le muscle). La plupart des enzymes = protéines Exception : certains acides ribonucléiques, les ribozymes holoprotéines (uniquement

les molécules d’ADN sur un support avec un champs électrique. Ce support est un gel c’est le gel d’agarose (algue) mais aussi le polyacrylamide qui est synthétique. Les molécules d’ADN vont du - vers le + car on travaille a pH = 8 à 8,5 et les groupements phosphates sont ionisés. Les grosses molécules migrent moins que les petites. L’agarose est utilisé pour une taille supérieure à 1 000 nucléotides et le polyacrylamide une taille inférieur à 1 000 nucléotides. L’ADN étant incolore on le colore

traitées pour l'ARNm total, et l'épissage des transcrits indiquées été analysés par RT-PCR. Lane 1 est cellules indifférenciées (UD). Voies 2-6sont des cellules différenciées à 72 h après transfection avec le LNA oligos indiqué et / ou siRNA. Gels de polyacrylamide-urée avec des produits de RT-PCR incorporant 5'- 32 marquées P-end amorces sont présentés à lagauche , avec la quantification de l'inclusion de l'exon graphiquement à la droite . L'exon inclus et produits sautées sont indiquées par des flèches