Élution

et de l'acide oxamique : un analogue du pyruvate. L'acide oxamique créera avec l'enzyme une liaison covalente cette fois beaucoup plus forte que celle créée entre l'enzyme et le bleu de Cibacron, permettant ainsi d'arracher du gel au moyen d'une élution par compétition, on obtient alors l'extrait enzymatique ou essaie. Le but est de purifier l’enzyme (notre protéine) pour enlever toutes les molécules contaminantes (comme certains inhibiteurs) Pour avoir une enzyme pure et totale. Le principe

lavage (courbe 2 et 3) L’absorbance est constante, il n’y a pas présence de l’enzyme pour ces deux fractions. 3ème étape : chromatographie, élution de la colonne Nous procédons ensuite à l’élution de la colonne pour récupérer les molécules retenues. Nous répétons l’élution 3 fois de suite (courbes, 4,5 et 6). L’absorbance de la première élution augmente pente : 0,6. Les enzymes LDH sont présentes dans cette fraction. Pour les deux autres fractions, l’absorbance est constante, il n’y a

chlorophylleExtraction et séparation de la chlorophylle Rapport de stage de Floriane Cere, Aude Burgat et Paul Scotto BTS Anabiotech Auzeville mars 2014 I. Etude bibliographique 1.1. Les pigments de la plante 1) Chlorophylle La chlorophylle, de part sa couleur verte, est le principal pigment contenu dans les plantes. Elle se trouve dans les chloroplastes des cellules végétales. Elle est indispensable pour l’activité photosynthétique de la plante qui consiste à produire de

au-dessus de l'adsorbant pour prévenir une remise en suspension de l'adsorbant. 4.5. Elution: On peut alimenter la colonne en continu à l'aide d'une ampoule de coulée ou bien ajouter manuellement l'éluant. Dans tous les cas, la surface de l'adsorbant ne doit jamais être au contact de l'air. En quelques minutes, une colonne laissée à sec se détériore: des fissures apparaissent dans la phase fixe et toute élution ultérieure se transforme en ruissellement. Pour la plupart des opérations, une vitesse

280nm au fur et à mesure que l'on ajoute du tampon, cela nous permet de savoir à quel moment les protéines sortent de la colonne. Lorsque la densité optique devient nulle ou constante cela signifie que tout à été décroché. 3- Enfin, on effectue une élution grâce à un tampon afin d'obtenir notre solution E contenant normalement le lysozyme purifié. II/ Matériel et Méthodes : Extraction du lysozyme Fixation du lysozyme sur la CM cellulose Dans un premier temps, on place les tubes de récupération

au-dessus de l'adsorbant pour prévenir une remise en suspension de l'adsorbant. 4.5. Elution: On peut alimenter la colonne en continu à l'aide d'une ampoule de coulée ou bien ajouter manuellement l'éluant. Dans tous les cas, la surface de l'adsorbant ne doit jamais être au contact de l'air. En quelques minutes, une colonne laissée à sec se détériore: des fissures apparaissent dans la phase fixe et toute élution ultérieure se transforme en ruissellement. Pour la plupart des opérations, une vitesse

pour assurer une rétention des composés convenable o Calcul de P’ o Si sélectivité insuffisante ,on remplace MeOH /ACN (prop ≠te du MeOH ,en gardant le même P4 rôle important du pH de la PM (tampon) pour composés ionisables : o + composé ionisé + élution rapide o si pH auquel ∃ recul d’ionisation →↑ rétention Ø Pharmaetudes Section 2 item 5 2.3 Chromatographie par échanges d’ion Ø Ø Ø Ø Ø chromatographi des substances ionisées(minéraux) ou ionisables en fct° du pH (moécules organiques)

Perméation de Gel (CPG) Chromatographie d’ Exclusion Stérique - Principe ? Gel réticulé ou phase stationnaire gonflé par la phase mobile Elution ? ? • Mesure des masses molaires moyennes, de Ip • Fractionnement possible des échantillons de polymère • Récupération totale de l’ échantillon • Simplicité, Rapidité Gel = bille sphérique poreuse Colonne Elution par ordre décroissant de taille Ve Essor considérable depuis les 1ers appareils commerciaux (1964 en France) Fractionnement ou séparation

Glycérol : permettre de densifié l’échantillon Le blanc utilisé pour la DO est PBS Purification : chromatographie d’affinité TUBE 6 GST P53 + Substrat de la GST : glutathion Incubation GST P53 Lavage et centrifugation TUBE 7 Elution : décrocher la protéine de la résine + GST P53  En clone  En batch (intérêt modulable en terme de quantité de résine, adapté les quantités de protéine à mesuré) Lyse des bactéries Deux méthodes Physique ou chimique :  Sonification :

probablement pur). Elle est utilisée pour rechercher les meilleures phases stationnaires et mobiles, avant d’entreprendre une séparation par chromatographie sur colonne. Méthode pour trouver la méthode d’élution la plus appropriée (la meilleure élution est celui qui, lorsque la phase mobile a terminé sa migration, a entraîné le soluté à une distance d’environ la moitié de celle qu’il a parcourue). 4) Appareillage : Les principaux éléments d’une séparation chromatographique sur couche mince