Élution

d) Renouveler au besoin ces dépôts plusieurs fois, en laissant sécher entre chaque dépôt e) Vérifier la qualité des dépôts en plaçant la plaque sous la lampe U.V. Si besoin, renouveler l'opération précédente (d). ← Elution : f) Placer la plaque dans la cuve à élution et refermer à l’aide de la boîte à pétri. g) Attendre que l’éluant monte jusqu’à 1 cm environ du bord supérieur. Retirer la plaque et repérer le front de l’éluant au crayon à papier. Laisser l’éluant s’évaporer sous la hotte

fera sur une plaque de silice avec pour éluant un mélange eau/éthanol. Dans un premier temps nous avons versé 3mL d’éthanol et 2mL d’eau distillée dans la cuve à élution. Nous avons mesuré les volumes avec des éprouvettes graduées. Ensuite nous avons écrasé du Doliprane et de la poudre blanche pour les mettre chacun dans une cuve a élution, pour les dissoudre partiellement dans le mélange eau/éthanol. Dans un second temps nous tracé un trait fin au crayon sur la plaque de silice a 1cm du bord pour

Dépôt Lavage Elution Après utilisation la colonne est régénérée et rééquilibrée avec différents tampons (tampons C, D et tampon de lavage) Chromatographie d’exclusion : Dépôt Elution Après utilisation la colonne est lavée avec 20 mL de tampon phosphate. 2) Résultats et discussion a) Chromatographie d’affinité Lavage Elution Les pics

les anticorps anti-BSA grâce a la forte affinité existant entre cet anticorps et son antigène. Le reste du sérum va passer dans la colonne sans être retenue. On va ensuite pouvoir récupérer nos anticorps avec une élution. Les différentes fractions correspondent aux différentes élutions de la colonne : ces fractions ne contiendrons pas la même quantité d'anticorps puisque les fractions ont été récupéré à différents moments de l'élution. Ces fractions ne contiendront que des anticorps anti-BSA contrairement

premières molécules, il suffit d’utiliser un gradient d’élution (modification de la composition de la phase mobile au cours du temps), c’est à dire utiliser une proportion d’eau et d’acétonitrile inchangée (50/50,V/V) jusqu’à élution des deux premiers pics puis augmenter le pourcentage d’acétonitrile dans la phase mobile pour diminuer le temps de rétention du troisième pi

d’injection se fait à l’aide d’une seringue, ou avec un système automatique d’injection. Les solutés sont injectés dans la colonne. Leurs différentes vitesses de déplacement à l’interieur de la colonne aussi appelé temps de rétention permettent leur élution et leur séparation. Un détecteur va suivre en continu l’apparition des solutés. ici nous utiliserons un spectrophotomètre UV-visible (190-600 nm). II. CALCULS ET RESULTATS : Calcule du volume mort de la colonne : Soit 150 = 1.495 ml INFLUENCE

fera sur une plaque de silice avec pour éluant un mélange eau/éthanol. Dans un premier temps nous avons versé 3mL d’éthanol et 2mL d’eau distillée dans la cuve à élution. Nous avons mesuré les volumes avec des éprouvettes graduées. Ensuite nous avons écrasé du Doliprane et de la poudre blanche pour les mettre chacun dans une cuve a élution, pour les dissoudre partiellement dans le mélange eau/éthanol. Dans un second temps nous tracé un trait fin au crayon sur la plaque de silice a 1cm du bord pour

baryum au détriment des molécules d’eau et devient insoluble. Il s’agit de la précipitation au BaCl2. La deuxième étape est une chromatographie échangeuse d’ions sur une colonne Diéthyl-amino-ethyl(DEAE)-Sephadex A-50 chargée positivement avec une élution de la prothrombine grâce un gradient de NaCl. Un test enzymatique nous permettra de suivre spécifiquement cette activité. II. Introduction La prothrombine est une chaîne polypeptidique précurseur de la thrombine. La thrombine, dans l'organisme

Seconde   Thème : Santé EN QUOI CONSISTE UNE CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM) ET À QUOI SERT-ELLE?     I.   VIDEO !   II.  QUEL  EST  LE  DISPOSITIF  DE  LA  CCM  ?     Une   cuve   à   élution   contenant   ELUANT.     Une  chromatoplaque  constituée  par  une   feuille  de  papier  Whatman  ou  par  un  support   aluminisé   sur   lequel   on   a   fixé   une   couche   poreuse  de  silice.         II.  COMMENT  VERIFIER  LA  COMPOSITION  DE   1.  Protocole

ceci et donc il faudra prendre l’inverse de ce qu’ils ont trouvé. Le pic 1 : Bleu Dextran, pic 2 : thyroglobine, pic 3 : apoferritine, pic 4 : b-amylase, pic 5 : alcool, pic 6 : albumine, pic 7 : anhydrase. Il faut tracer la courbe log(PM)=f(V élution) et non pas la courbe log (PM)=f(N° du tube), (voir courbe au dos). Dans annexe 1 il manque les noms des axes comme pour l’annexe 2. Leur poids moléculaire est faux sachant qu’ils n’ont pas tracé la bonne courbe, ils ne pouvaient donc pas lire les