Endonucléase

chez les procaryotes il existe un système multi enzymatique comprenant une endonucléases associée à une exonucléase bidirectionnelle (3’5’ et 5’3’), à une ligase et à une ADN pol III. Réparation des dimères de thymines : ces dimère sont produit par les UV lorsque deux thimines sont contiguës sur le même brin = photodimèrisation. La réplication s’arrête au niveau du dimère car la polymérase en peut plus avancer, une endonucléase coupe une dizaine de nucléotides autour du dimère, il y a ressynthèse par

insérés le vecteur. Sur le plasmide on peut donc observer de nombreux sites de restriction pour les enzymes donc un endroit appelé site de clonage multiple où un grand nombre d’enzymes de restriction agit. 3° Une enzyme de restriction est une endonucléase qui ne coupe que sur des sites définis au niveau de séquence palindromiques de 4 à 6 paires de bases. Elles coupent les deux brins d’ADN. Il en existe deux types : celles libérant des bouts francs et celles libérant des extrémités cohésives.

montre que les cellules atteintes de cette maladie ont peu de chance de survie si elles sont exposées à un rayonnement d'UV, l'autre montre que certaines enzymes peuvent réparer cette anomalie. Le doc.3 nous apprend que des enzymes appelées " endonucléases " font partie d'un système de réparation de l'ADN et que des défaillances dans ce système provoquent des maladies graves et notamment le xeroderma pigmentosum. Le doc.4 montrent deux types de mutations :les mutations somatiques qui n'affectent

5’-> 3’ Pas d’activité exonucléasiquePrimaseAllongement de l’ADN ADN pol DELTA Polymérase 5’ -> 3’ Exonucléasique 3’ -> 5’ ADN pol III Polymérase 5’ -> 3’ Activité exonucléase 3’ -> 5’ Destruction des amorces RNAse H ou FLAP endonucléase ADN pol EPSILON même rôle que la DELTA ADN pol BETA Répare les erreurs ADN pol I Synthèse 5’ -> 3’ Activité exonucléase 5’ -> 3’ Peut don détruire les amorces Ligation (ATP dépendant) ADN ligase Rattache le 5’phosphate au 3’

le puits 9, on observe une bande au même niveau que celle du puits 2, on en déduit que l’ADN n’a pas totalement été digéré par les enzymes et qu’il reste des plasmides sous formes circulaires relâchées.) Rôle de la RNaseA La RNaseA est une endonucléase qui reconnait les pyrimidines et hydrolyse les ARN simple brin. Sur l’électrophorèse n°2, dans les puits 1 à 4 ont été introduit dans l’ordre : 1-marqueur de poids, 2-gène wzc, 3-plasmide+RNaseA, 4-plasmide sans RNaseA. Entre le puits 3 et 4

brins de l’ADN et ainsi permettre l’accès des ADN polymérases et la réplication. Dans le cas des processus de réparation et de recombinaison, l'amorce est constituée d'un segment d'ADN résultant de la coupure du brin endommagé ou recombiné par une endonucléase, qui libère une extrémité 3'-OH libre. [modifier] Elongation et processivitéLes diverses ADN polymérases se différencient par leur capacité à allonger l'ADN sans se dissocier du brin matrice. Certaines ADN polymérases sont faiblement associées

gène de résistance à l’ampicilline, un site multiple de coupure et le gène Lac-Z qui code la Beta-galactosidase. La digestion consiste à couper les liaisons phosphodiesters entre les bases à partir d’une enzyme de restriction. Cette enzyme est endonucléase, une protéine qui coupe à des sites spécifiques, sous forme de palindrome appelés sites de restriction. Dans ce TP, on a utilisé EcoR1 qui coupe la séquence GAATTC et HindIII intervenant ne AAGCTT. La digestion est partielle, c'est-à-dire qu’elle

taille est un mélange de fragments d'ADN linéaires bicaténaires dont les tailles sont connues. | | Ces marqueurs peuvent être achetés dans le commerce ou fabriqués au laboratoire à partir d'une molécule d'ADN naturelle digérée par des endonucléases de restriction. | - L'électrophorèse en champ pulsé: ce type d'électrophorèse a été développé à partir de 1984 afin de séparer les grandes molécules d'ADN (>50 kbp), que l'électrophorèse traditionnelle en agarose ne permet pas de résoudre

taille: - Des marqueurs fabriqués à partir d'une molécule d'ADN naturelle digérée par des endonucléases de restriction. Un marqueur de ce type, très fréquemment utilisé, est l'ADN du phaqe lambda diqéré par une ou deux endonucléases Comme la séquence de l'ADN de lambda est connue on peut calculer le nombre et la taille des fragments obtenus par digestion avec n'importe quelle endonucléase de restriction. Ce marqueur peut être soit préparé au laboratoire, soit acheté dans le commerce

cellule meurt le contenu cellulaire est réabsorbé. Et des nucléases (dégrade les acides nucléiques) en coupant les liaisons entre les nucléotides. Les exonucléases commencent par les extrémités. Pour dégrader les acides nucléiques on utilise des endonucléases. Une fois que les liaisons sont clivées on obtient un monomère qui est un nucléotide. La cellule peut utilisé les nucléotides mais elle vont utilisé une nucléotidase pour obtenir un nucléoside avec un acide phosphorique. Les nucléotidases