Fluorochrome

microorganisme : Les différents types de microscopie et colorations: a) optique: a. Contraste de phase à fond noir et a fluorescence : i. Noir: Bactérie vivante, mobilité ii. Fluorescence: Spécimen fluorescent, fluorochrome, ultraviolet, DAPI, Coloration Viable, Anticorps fluorescent b. Fond Clair : Avec coloration (spécimen mort), Gram c. Confocale Laser: Image 3D, rarement diagnostique b) électronique d. Transmission : Coupe, envoi d'électron

rayonnement ultra-violet. Cette lumière est transformée en lumière visible proche du blanc, par la couche la couche fluorescente qui tapisse la surface interne du tube. La fluorescence est la propriété que possèdent certaines molécules ,(appelées fluorochromes ou fluorophores) d'absorber la lumière à certaines longueurs d'ondes correspondant à une certaine couleur ,et de réémettre une lumière à une autre longueur d'onde correspondant à une autre couleur. Ces molécules, à l'état de repos, absorbent l'énergie

Reverse transcription et marquage Obtention d’ADNc totaux marqués Hybridation de ces ADNc sur la puce Deux marquages possibles ADNc marqués [P33] dCTP ARNm totaux Marquage radioactif Populations cellulaires Marquage avec fluorochromes ARNm totaux Cy3 CyX dCTP Cy5 ADNc marqués Interaction entre la sonde et la cible: HYBRIDATION MOLECULAIRE Lame de verre comportant les sondes fixées Cible: ADNc du gène X …TCCCAGCTGAAT… dépôt contenant les sondes spécifiques du

transcrire possède le promoteur spécifique correspondant. Marquage et suivi des acides nucléiques Marquages froids : fluorescence ; colorimétrie ; chimioluminescence Fluorescence Absorption d'énergie lumineuse par une molécule (fluorochrome) Passage à l'état de Molécule excitée Relaxation partielle avec perte de chaleur par échange avec le milieu ambiant Retour à l'état fondamental par émission lumineuse ( de plus grande longueur d'onde que l'onde de stimulation) = spectre de

l’exception du remplacement Thymine-Uracile qui trouve également son complémentaire dans la molécule d’ADN qui est l’Adénine. Le but serait de marqué l’ARN soit radio activement (sonde radioactive) ou par fluorescence (deux fluorochromes, un recorder et un quencher). Les fluorochromes s’hybrident à une portion de l’ARN et devraient être suffisamment proche. Le quencher cache ainsi l’émission par le reporter. Au cours de la réplication, il y aura ouverture des deux brins d’ADN codant pour les AQPs si elles

 Donnez un exemple.    MÉTHODES D’ÉTUDE DE LA CELLULE  1. comment fonctionne un microscope optique? Un microscope à fluorescence? et  un microscope électronique à transmission? Un microscope électronique à  balayage?  2. quels sont les propriétés d’un fluorochrome et d’une protéine fluorescente?  3.  Expliquez la technique de l’immunofluorescence?  4. qu’est ce que permet un microscope confocal que ne permet pas un microscope  à fluorescence classique?  5. quelle est la différence entre un lysat et un homogénat

image par détection de cette lumière émise. De nombreuses techniques de marquage peuvent être utilisées : - Le marquage simple se fait par affinité entre un fluorochrome et la molécule à marquer. L'immunomarquage direct ou indirect fait intervenir un anticorps marqué. Application : dénaturation de l'ADN marqué par des fluorochromes. 8 (Source Wikipédia) d) Le microscope électronique. La microscopie électronique à transmission est une technique de microscopie où un faisceau d'électrons

image par détection de cette lumière émise. De nombreuses techniques de marquage peuvent être utilisées : - Le marquage simple se fait par affinité entre un fluorochrome et la molécule à marquer. L'immunomarquage direct ou indirect fait intervenir un anticorps marqué. Application : dénaturation de l'ADN marqué par des fluorochromes. 8 (Source Wikipédia) d) Le microscope électronique. La microscopie électronique à transmission est une technique de microscopie où un faisceau d'électrons

ADN. Besoin de : NTP marqués avec des bases modifiées CHAUDES : présence d’atomes radioactifs, révélation par autoradiographie. FROIDE : on utilise la DIGOXYGENINE (est reconnu, pour la révélation, par un anticorps qui sera couplé soit à un FLUOROCHROME, soit à une ENZYME (phosphatase alcaline) dont l’envoie d’un substrat colorera en bleu les séquences hybridées.) Promoteurs ARN polymérase, extraite de bactériophage. Une matrice Il existe deux techniques de fabrication des sondes : RANDOM

que les Southern et Northern Blot se font sur des broyats de tissus, alors que l'HIS s'effectue sur une coupe histologique de tissu. Figure : Technique de l'hybridation fluorescente in situ. En A : sonde. B : sonde colorée à l'aide d'un fluorochrome. C: hybridation avec l'ADN nucléaire. D: apparence du chromosome métaphasique où la sonde s'est fixée. Hybridation de type Southern Ce type d'hybridation vise la recherche de fragments spécifiques d'ADN viral et/ou chromosomique, obtenus