Gel de silice

une technique de séparation de composants dans un but d'analyse qui repose essentiellement sur l'adsorption. Elle se compose d'une phase mobile et d'une phase stationnaire. La phase stationnaire est une couche mince de matériel adsorbant (ici du gel de silice sur une plaque d'aluminium). La phase mobile est le mélange de solvants qui va entraîner les composés à se séparer le long de la phase stationnaire. En faisant des dépôt de substances (sur une ligne de dépôt) et en déposant la plaque dans une cuve

méthanol. Ensuite nous avons effectué deux chromatographies sur couche mince dans le but d’identifier les lipides extraits à l’aide de deux sortes de solvant plus ou moins polaires. Les échantillons de jaune d’œuf sont déposés sur la plaque en gel de silice. Ils seront par la suite analysés et identifiés en étant comparés aux échantillons de lipides témoins. Cette identification est possible grâce aux calculs de rapports frontaux. Principe : La première étape de cette expérience débute par

K: K = On peut classer les méthodes chromatographiques d'après la nature des phases utilisées ou celle des phénomènes mis en oeuvre dans la séparation. Nature des phases: Phase fixe: La phase fixe peut être solide ou liquide. Les solides, silice ou alumine traitées, permettent la séparation des composants des mélanges grâce à leurs propriétés adsorbantes. Ils peuvent être employés comme remplissage d'une colonne (chromatographie par gravité et chromatographie à haute performance ou HPLC)

couche mince Solution T : mise en solution d'une capsule dans 1 litre de solution d'HCl 0,2 mol/L , puis filtrée. 1.1.Préparation des phases: * Phase stationnaire: Identifier une plaque de gel de silice Marquer la ligne de dépôt à 1,5 cm du bord inférieur. Réactiver les plaques de gel de silice à l'étuve à 110° C pendant 15 min. *Phase mobile: (sous la hotte) Mettre environ 8 mL de phase mobile dans une cuve et laisser saturer au moins 20 min. Composition de la phase mobile: n butanol

d’un mélange liquide ou gazeux par passage dans une matière poreuse ou divisée. On distingue une phase stationnaire ( le gel de silice déposé en couche d’épaisseur uniforme sur un support rigide ) et une phase mobile ( un solvant appelé éluant dont la nature dépend des constituants à séparer ). On dépose un échantillon du produit à analyser sur la plaque recouverte de gel de silice puis on place la plaque dans une cuve contenant l’éluant. Celui-ci progresse dans la phase stationnaire ( essentiellement

qu’il existe deux phases stationnaires en HPLC, pour la chromatographie d’adsorption et de partage : La phase normale : Constitué de gel de silice, ce matériau est très polaire. Lors de l’injection d’une solution, les produits polaires seront retenus dans la colonne et les produits apolaires sortiront en tête de colonne. La phase inverse : Constitué de silice greffée par des chaines linéaires de 8 ou 18 carbones, ce matériau est apolaire. Cette phase nécessite donc un éluant polaire (H2O ou MeOH

constituée de gel de silice. Ce matériau est très polaire. Il faut donc utiliser un éluant apolaire. Ainsi lors de l'injection d'une solution, les produits polaires sont retenus dans la colonne, contrairement aux produits apolaire qui sortent en tête. L'inconvénient d'une telle phase, c'est une détérioration rapide au cours du temps du gel de silice, ce qui entraîne un manque de reproductibilité des séparations. - La phase inverse : La phase inverse est majoritairement composée de silice greffées

CLPgreffée      Groupemt org. lié chimiquement à un gel CLS Solide ou gel  Partage entre liq. et surface greffée Adsorption CLG      Liq. ds les pores d'un gel de polymère réticulé      Partage/Tamisage(sieving)  (Chr. liquide­gel; perméation;  size exclusion) C.Ionique                    Polymère organique réticulé greffé  Echange d'ions C.Affinité                     Support greffé porteur d'ions (IMAC)             Liaison donneur­accepteur ElectroC                       gel de silice ou polymère organ. greffé            Mobilité ds champ électr

analytique 1.5 La phase stationnaire (voir type de chromato correspondante) Ø Ø Située dans la colonne 2 types de PS : o PS imprégnées : § Phase solide de silice retenant à sa surface les composés § Surtt utilisé en chromato d’adsorption (S/L) o PS greffées +++ § Formées par formation de liaisons covalentes entre les gpt silanols de la silice et des molécules organiques de nature variées § Le plus courant = diméthylchlorosilane § Les carac de la PS greffée sont déterminées par la nature du gt

Chromatographie s sur colonnes Approches quantitatives Suivant le choix de la matrice (Phase stationnaire), les biomolécules peuvent être séparées selon: • leur taille (chromatographie par filtration sur gel) • leur charge (chromatographie par échange d’ions) • leur capacité à se fixer à des groupements chimiques particuliers (chromatographie 1. chromatographie d'exclusion 2. chromatographie d'adsorption 3. chromatographie de partage 4. chromatographie ionique I/ Chromatographie Traditionnelle