L Invertase

TP N°2 : Dosage des sucres réducteurs par le DNS • But : - Préparation d’une gamme d’étalonnage en sucre interverti. - Dosage d’un sucre non réducteur : le saccharose. • Principe du dosage par le DNS: Le DNS (3,5-acide dinitrosalicylique) à chaud et en présence de sucres réducteurs développe un produit réduit de couleur rouge-brune l’acide 3-amino-5-nitrosalicylique. La technique du DNS est un moyen de détermination de la teneur en sucres réducteurs libres présents dans

appréciera les qualités d'organisation, la précision des gestes techniques, le respect des règles d'hygiène et de sécurité en laboratoire et l’utilisation du cahier du laboratoire. 1. Introduction 1.1 La réaction catalysée La  fructosidase ou invertase ou saccharase de levure (D fructofurannoside fructohydrolase, EC 3.2.1.26) catalyse l'hydrolyse de la liaison osidique du saccharose. Equation : Saccharose + eau à D-glucose + D-fructose. = Sucre inverti A savoir : Le glucose

b-fructofuranosidase (invertase) de la levure TP 1. Extraction de l’invertase de la levure et étalonnage d’une solution standard de glucose + fructose pour la méthode a l’acide dinitrosalicylique (DNS) TP 2. Détermination de la vitesse initiale d’une réaction enzymatique TP 3. Détermination des constantes cinétiques KM et Vmax d’une réaction enzymatique TP 4. Etude de l’influence du pH et de la température sur une réaction enzymatique 1 Extraction et étude de l’activité de la b-fructofuranosidase (invertase) de

plusieurs type d’hydrolyses mais la plus connue est l’HYDROLYSE ENZYMATIQUE (besoin d’un enzyme = INVERTASE plus de l’eau plus d’une température modérée = 37°) DISACCHARIDE + H2O MONOSACCHARIDE1 + MONOSACCHARIDE2 + enzyme = INVERTASE + T=37°C La plus connue est l’HYDROLYSE ENZYMATIQUE de la SACCHAROSE SACCHAROSE + H2O GLUCOSE + FRUCTOSE + enzyme = INVERTASE + T=37°C Le mélange de GLOCOSE+FRUCTOSE (en quantités égales – mélange équimolaire) obtenu est

5%). Il y a d’autres polysaccharides comme l’isomaltose et le panose. Le glucose et le lévulose sont origines de l’invertase sur le saccharose. Cette invertase est une enzyme se trouvant dans l’intestin grêle de l’abeille. Le saccharose subit alors une hydrolysation. Voici la formule chimique de l’hydrolysation du saccharose avec l’enzyme invertase : L’origine des autres sucres, les polysaccharides, est peu connue, mais il semblerait que la nature et la quantité de ces sucres dépendent de la

SCIENCES ET TECHNIQUES DEPARTEMENT DE BIOLOGIE TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE ENZYMOLOGIE Troisième année Biologie et STA1 Elaboré par : Ali O. Med Salem O. BOUKHARY 2009-2010 0 SOMMAIRE Etude de l’activité de la b-fructofuranosidase (invertase) de la levure TP 1. Extraction de l’invertase de la levure et étalonnage d’une solution standard de glucose + fructose pour la méthode a l’acide dinitrosalicylique (DNS) TP 2. Détermination de la vitesse initiale d’une réaction enzymatique TP 3

de maltose et saccharose et fructose montre que ces sucres sont des substrats pour la fermentation des levures. -Glucose et fructose sont absorbés et fermentés par les Levures après hydrolyse enzymatique extracellulaire du saccharose par une invertase exportable -l’absence de dégagement de dioxyde de carbone en présence de lactose montre que les levures ne métabolisent pas par fermentation cette substrat. -La Levure ne possède pas de lactase -la respiration de levures s’accompagne d’une

au front du solvant Voir feuille annexe pour les calculs Quelles sont les différences entre hydrolyse chimique et enzymatique ? 100°C, H2SO4, 15 minutes L’acide est le catalyseur chimique C12H22O11 + H2O C6H12O6 + C6H12O6 37°C, invertase, 2 minutes ici le catalyseur est un extrait de matière vivante : c’est un catalyseur biochimique = enzyme On remarque qu’une hydrolyse enzymatique demande moins d’énergie (temps et chaleur), est beaucoup plus rapide et nécessite des conditions

consommant du sucre régulièrement et/ou excessivement. 1) D’abord, le sucre mangé se mélange à la salive. Le saccharose est avalé, et passe dans le système digestif. Il est ensuite absorbé par des cellules, et digéré. Il est cassé en 2 par l’enzyme invertase, qui hydrolyse le saccharose : cela donne du glucose et du fructose. Le cerveau ne peut utiliser aucune autre source d’énergie que le glucose. En son absence, il cesse de fonctionner normalement, et il se détériore rapidement. Si l’absence

principale (hydrolyse enzymatique : hydrolyse enzymatique) b-fructosidase Saccharose + H2O glucose + fructose Sucre inverti (réducteur) En présence d'eau et à température modérée, soit 37 °C, le saccharose, par l'effet de l' , l'enzyme invertase, s'hydrolyse en glucose et en fructose, ce qui permet son assim , assimilation par l'organisme. Le mélange produit par l'hydrolyse est un mélange équimolaire de glucose et de fructose, appelé sucre inverti. Il est néanmoins exceptionnel de trouver