Ligase

’ARN du fragment d’Okazaki suivant par son activité d’exonucléase 5’→ 3’. (c) L’ADN polymérase I se retire lorsque l’amorce d’ARN a été totalement éliminée. Elle est remplacée par l’ADN ligase. (d) L’ADN ligase referme la césure finale et se retire à son tour. 9 Fonctionnement de l’ADN ligase E. coli 10 11.6 Séquençage d’un nucléotide d’ADN Méthode de Sanger La polymérisation par le fragment de Klenow s’arrête quand un didésoxyribonucléotide (ddXTP) est incorporé au lieu

FLAP endonucléase ADN pol EPSILON même rôle que la DELTA ADN pol BETA Répare les erreurs ADN pol I Synthèse 5’ -> 3’ Activité exonucléase 5’ -> 3’ Peut don détruire les amorces Ligation (ATP dépendant) ADN ligase Rattache le 5’phosphate au 3’ OH ADN ligase Les ADN polymérases extraites de bactéries THERMUS AQUATICUS PYROCOCUS FURIOSUS Nom de l’ADN polymérase Taq polymérase Pfu polymérase Température d’activité 70°-75°C 8 fois plus efficace à 100°C Activité polymérase

fragment II, l’ADN polymérase remplace la séquence de l’amorce par de l’ADN Lorsque l’extrémité 3’ du fragment II arrive au contact de l’extrémité 5’ du fragment I, l’ADN polymérase arrête la synthèse. Il intervient une nouvelle enzyme que l’on appel LIGASE et qui permet de relier les deux fragments l’un à l’autre La machinerie enzymatique va permettre la synthèse de ce nouvel ADN, la réplication continu tant que l’hélicase n’a pas dissocié deux paires de bases. Au final, toute la molécule d’ADN

restriction capables de couper l’ADN (exp2), et de l’ADN ligase capable de recoller les fragments d’ADN. La ligase a été isolée pour la première fois à partir du bactériophage T4. Cette enzyme est impliquée dans la réparation et la réplication de l’ADN. Elle peut lier des fragments d’ADN ayant des bouts collants (exp2) compatibles. A plus grande concentration, cette enzyme est également capable de lier deux bouts francs d’ADN. La T4 ADN ligase fonctionne en utilisant de l’ATP et du Mg2+. Elle possède

d'une sorte d'étalement d'ADN de tailles différentes). Le fragment le plus supérieur se trouve à environ 12 000 paires de bases, le plus « en bas » semble constitué d'environ 4 000 paires de bases. B. Ligation et transformation bactérienne. La ligase est une enzyme à l'origine de la ligation. Celle-ci a pour but de rétablir les liaisons entre le plasmide précédemment linéarisé et l'un des fragments d'ADN précédemment segmenté. La transformation bactérienne peut être définie comme l'insertion

polymérase T7 (sequenase) ADN polymérase Taq (T. aquaticus) + + + + 10 + 285 9 40 5 Les ADN polymérases les plus fréquemment utilisées IGM L'ADN ligase Ligature d'une brêche IGM L'ADN ligase Ligature de deux fragments ayant des extrémités franches IGM L'ADN ligase Ligature de deux fragments ayant des extrémités cohésives IGM La phosphatase alcaline IGM La polynucléotide kinase IGM Electrophorèse des acides nucléiques

bien précis. Le nom des enzymes de restriction provient de la bactérie dont elles ont été isolées, par exemple Eco RI provient d'Escherichia coli souche R, le I signifie que c'est la première enzyme qui a été découverte. D/ L’ADN ligase Une ligase est une enzyme capable de créer une nouvelle liaison covalente entre deux molécules. E/ Le transcriptase inverse La transcriptase inverse (RT) est une enzyme utilisée par les rétrovirus qui transcrivent l'information génétique des virus

III : élongation de 5’ en 3’ et de la correction sur épreuve (2 sous unité une pour chaque brin). L’ADN pol I : qui élimine les amorces ARN du brin retardé par son activité exonucléasique 5’3’ et comble le trou par son activité polymérase. L’ADN ligase : qui lie entre eux les fragments d’Okasaki. Protéine Tus au site de terminaison met fin à la réplication. VI – La réplication chez les eucaryotes. Même principe que procaryotes avec le brin avancé et le brin retardé, mais avec quelques différences :

Instituto de la Comunicación de Barcelona; y el libro “Actividad física y deporte en sociedades multiculturales. ¿Integración o segregación?” (Lleixá y Soler, 2004). En la Comunidad Valenciana, la investigación “El deporte une bastantísimo aquí: las ligas de fútbol de la Asociación de Latinoamericanos y Ecuatorianos Rumiñahui en Valencia” dirigida por Llopis y Moncusí (2005). 3.2. Estudios e investigaciones realizados en Europa En Alemania, destacan los trabajos realizados por Frogner (1985) sobre el

ce plasmide. 3- Inactivation des enzymes de restriction. 4- Analyse par électrophorèse sur gel d'agarose des fragments d’ADN produits pendant les digestions 1 et 2. 5- Ligation des fragments produits dans l’étape 1 dans le plasmide, utilisant une ligase (une « colle moléculaire »). 6- Introduction des molécules recombinantes produites pendant l’étape 4 dans les bactéries par transformation chimique. 7- Étalement des bactéries sur les boîtes de Pétri : de l’agar (extrait d’algues) dans lequel on a