Ligase

que cela entraîne l’apparition d’une espèce nouvelle. Les outils de la seconde moitié du XXe siècle ont ouvert l’ère de la génomique et annoncent celle de la postgénomique ! La découverte, dans les années 1970, des enzymes de restriction et des ligases, qui permettent respectivement de couper et de coller entre eux des fragments d’ADN a bouleversé l’approche du monde vivant. Il devient désormais possible d’isoler physiquement un gène (en découpant l’ADN de part et d’autre) et de l’intégrer dans

seguido en el Ecuador es el fútbol. Los clubes profesionales más populares son, en orden según el número de su fanaticada: >Barcelona, Liga de Quito, Emelec ,El Nacional, entre otros. El fútbol también es practicado masivamente y son muy comunes las ligas barriales y de las ciudades.

sur l’autre brin (3’ © 5’, « lagging strand ») fait donc appel à un autre mécanisme. En effet, sur ce brin, l’ADN polymérase produit de longues séries de fragments, les « fragments d’Okazaki », qui sont ensuite reliés les uns aux autres par une ADN ligase. Parmi les nombreuses protéines qui interviennent (au moins 27 au niveau de la fourche de réplication), mentionnons simplement l’ADN hélicase, qui déploie la double hélice et l’ADN primase qui produit les amorces pour les fragments d’Okazaki. p27

Chez les eucaryotes p23 A lieu lors de la phase S du cycle Il y a des multiples point d’initiation Les Mutations p24 DNA pol I = enzyme de reparation de l’adnElle excise les dimères de thymine et on refait une liaison phosphodiester par une ligase Les agents chimique : UV par irradiation Agent alkylant : ajout groupement alkyl (methyl ou ethyl) methyl trasferase repare en transferant le gpmt methyl à la protéine =>désalkylationDépurination : insertion de la bonne base Désaminé : couper

propriétés des bactéries. Pour l’expliquer nous allons diviser cette technique en cinq grandes étapes : 1. Il faut tout d’abord introduire le gène dans un plasmide. Plusieurs enzymes peuvent être utilisées comme la Ligase qui permet l’union de 2 molécules. Pendant que la Ligase travaille l’ADN va dans le plasmide ce qui lui donne de nouvelles caractéristiques. Ce qui forme donc un nouveau plasmide génétiquement modifié avec le gène d’intérêt. 2. On incorpore ce gène à une bactérie de type

nucléotides les uns après les autres, c’est L’ADN POLYMERASE Séparer les deux brins d’ADN parentaux, c’est l’ hélicase Poser des amorces pour debuter la réplication, c’est l’ARN polymérase Détruire des amorces et relier des « bouts » d’ADN c’est la LIGASE Nous allons tout de suite voir leur rôle plus en détails : III. LE MÉCANISME DE LA RÉPLICATION Avant d’aborder le mécanisme, un petit rappel est nécessaire : L’ ADN est formé de deux brins mis en antiparallèle et chacun orienté de 5’ vers 3’. Enfin

des brins en deux. 2/ Les protéines de liaisons empêche les brins de se recoller. 3/ Polymérase qui synthétisent le nouveau brin 5’ 3’. 4/ Le brin direct est retranscrit. 5/ le brin 3’ 5’ est retranscrit par petites parties. 6/ Une ligase recolle ces petites parties. Une fois la duplication terminé, l’ADN se repli, mais il n’est pas tout seul. En effet il s’enroule autour d’histone (protéines) : il s’associe avec l’ADN pour le bloquer. La transcription Elle induit la séparation

protéases non spécifiques Peptides (~8 AA) Protéine condamnée Protéasome E1: Enzyme qui active l’ubiquitine E2: Enzyme catalysant la conjugaison de l’ubiquitine à la protéine cible. 12 E3: Enzyme qui reconnaît la protéine cible (ubiquitine ligase) animation.swf Régulation du temps de vie d’une protéine AA hydrophobes Signal pour la dégradation AA hydrophiles Protéine normale Dans une protéine bien repliée les AA hydrophobes sont à l’intérieur Protéine mutante, mal

(ligature...) •Comment obtenir l’ADN de l’organisme donneur ? Quelles informations porte cet ADN? Comment sélectionner le fragment d’ADN voulu? •Qu’est ce qu’une enzyme de restriction? •Quels sont les vecteurs de clonage? Une enzyme, la ligase, est capable •Comment l’ADN d’intérêt et le vecteur sont-ils liés? de lier de façon covalente deux •Les cellules hôtes molécules d’ADN en une. •Comment l’ADN recombinant est introduit dans une cellule hôte et comment celle-ci se multiplie

végétaux) Hémisynthèse Génie génétique Difficultés: Risques sanitaires Contaminations Hémisynthèse difficile Coût élevé Rendement de production faible Protéines recombinantes INGÉNIERIE GÉNÉTIQUE: = enzymes de restriction = ADN ligase Transfert de l’information génétique à un hôte cellulaire INGÉNIERIE GÉNÉTIQUE: PRODUCTION RECOMBINANTE DE PROTÉINES Principe : • Identifier et isoler le gène codant pour la protéine d’intérêt thérapeutique •Replacer cette information génétique