Microtube

avons préparé un millilitre de tampon d'extraction. Pour cela nous avons avons mis dans un microtube, maintenu au froid, à l'aide de micro-pipettes 200µL d'une solution mère de Tris-HCL 1M, 50µL d'une solution mère 0,5M pH8, 50µL de solution mère de NaCl 5M,ainsi que 25µL de solution mère de SDS à 20% et nous avons compléter avec 675µL d'eau distillée stérile et froide. Ensuite, nous avons pris un microtube dont nous avons refermé le couvercle sur la feuille de pétunia tel un emporte pièce afin de

pesés. Nous avons ensuite broyés nos échantillons dans un microtube à l’aide d’un pilon. Puis on ajoute un tampon d'extraction qui hydrolyse la membrane nucléaire. Il est fait à partir de 200 µL de Tris-HCl, 50 µL d'EDTA, 50 µL de NaCl, 25 µL de SDS et 0,675 mL d'eau pure. Il faut faire attention à toujours laisser les solutions à proximité ou dans la glace pour limiter l'activité enzymatique. 0,4 mL de ce tampon sont ajoutés dans le microtube puis on mélange énergiquement à l’aide d’un vortex. Puis

Préparation de rétrovirus MSCV concentré dans des cellules Eco-Phoenix. Date : 02.04.2014 Culture Eco-Phoenix. Matériel PBS 1X sterile DMEM (4,5g/l glucose) + 10% FCS i 407 + 1 mM PyrNa + PS Trypsine diluée 1. Aspirer le milieu de culture et laver les cellules au PBS. 2. Ajouter 1 mL de trypsine diluée pour une T75 et incuber 5 min à 37 °C. 3. Decoller les cellules en tappant sur le bord de la boite. 4. Ajouter 9mL de milieu et rincer la surface de la boite 2-3 fois. 5. Recuperer les cellules

DNA extraction protocol • Broyer ~150 mg de feuilles finement ciselées dans 300 µl de tampon d’extraction préchauffé à 74°C à l’aide d’un mortier et pilon • Lorsque le broyage est complet ajouter encore 300 µl de tampon d’extraction et transférer le broyat dans un tube eppendorf de 1.5ml • Bien mélanger au vortex • Incuber à 74°C pendant 30 min au bain marie • Refroidir a température ambiante • Ajouter 500 µl de chloroforme/isoamylalcool (24:1) • Mélanger

un petit contenant. 2) Transférer 1000 μL dans un microtube de 1,5 ml. Refermer et écrire le # d’équipe sur le couvercle. 3) Centrifuger à vitesse maximale pendant 90 sec. Pendant la centrifugation, pipetter 100 μl de résine Chelex dans un microtube de 0,5 ml (Important : juste avant de prélever la résine, bien la suspendre en agitant le contenant au Vortex). Réserver pour l’étape #6. 4) Après la centrifugation, observer un culot au fond du microtube et rejeter délicatement le surnageant par une simple

tubes portant un numéro • 2 tubes à bouchon vissé de 1.5mL (200 μL de tampon de lyse InstaGene + Protéase) • 2 microtubes PCR vide de 200 μL • 2 Adapteurs à microtubes PCR• 1 Pince à épiler• Tampons d’alcool 70% pour désinfection• Bloc chauffant• Centrifugeuse• 4 microtubes PCR blancs ouverts et vides• 3 microtubes PCR de couleur contenant 10 μL de contrôles positifs (C) • 1 microtube marqué M contenant le Master Mix • 1 Micropipette de 20 μL• Embouts à micropipette de 20 μL• 1 Thermocycleur•

transférer dans un microtube de 1,5 ml. - Ajouter 300 μl de solution 2, mélanger délicatement par inversion et incuber 5 min à température ambiante. La solution devient très visqueuse. Purification de l’ADN plasmidique : - Ajouter 300 μl de solution 3 et mélanger immédiatement mais délicatement par inversion du tube. Observez la précipitation des débris bactériens et de l'ADN chromosomique. - Centrifuger 10 min à 12000 g (vitesse maxi). - Transférer le surnageant dans un microtube neuf : noter

(environ 100ng) de l’ADN génomique et les transférer dans 3 microtubes pour PCR (tube à paroi fine de 200 µl). Chaque tube doit être identifiée et porter vos initiales (vous devez retrouver dans le prochain TP toutes les informations sur le type de PCR : I,II,III et le type de plante). Numérotez vos tubes !!! 3. Confectionner un tube de mélange réactionnel pour 2 PCR de chaque type de réaction de PCR qui sera ensuite divisé dans les deux microtubes de PCR correspondant aux deux extraits. Mix I : amorces

croissance de la souche indicatrice autour de la souche productrice. Source: http://microbiologie.univ-tours.fr/tp_m1_UE7_5a.pdf Résultats Galerie d'identification API Staph La galerie API Staph comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne réalisée en API Staph Medium qui reconstitue les tests. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par

3Matériel et produits Voici le matériel que nous utiliserons au long de ce travail pratique ; Matériel | Produits | Micropipettes et embouts 0.5-10µl et 20-200 µl | 1 x tampon TBE | Microtubes Eppendorf 1.5 ml | Agarose en poudre | Support pour microtubes | Solution de bromure éthidium à 0.5µg/ml | Bloc chauffant | Solution d'ADN 1 et 2 | Centrifugeuse | Tampon de charge (blue/orange loading dye 6 x) | Cuve pour électrophorèse et