PCR

I. Présentation des plasmides 1. Plasmide pUT 599 2. Plasmide pUT 654 3. Plasmide pUT 807 4. Intérêt du plasmide pUT 807 II. Principe des méthodes utilisées. 1. La PCR 2. Intérêt de la PCR et conditions opératoires 3. Réactions enzymatiques : restriction et ligation 4. Electrophorèse en gel d’agarose a) Migration/Séparation b) Conditions opératoires

1 Construction d’indicateurs épidémiologiques à partir du Système d’information de dépistage (SI-DEP) : Indicateurs sur les mutations 06/01/2022 EVOLUTION DE LA STRATEGIE DE CRIBLAGE Les tests RT-PCR de criblage utilisés et dont les résultats sont remontés dans SI-DEP permettaient de suspecter la présence du variant préoccupant (VOC) Alpha (20I/501Y.V1) et de manière non distincte des VOC Bêta (20H/501Y.V2) ou Gamma (20J/501Y.V3). Cette stratégie de criblage ciblant les VOC Alpha, Beta

HARDY David ROCCHETTI Loïs BCMP 1 Amplification de l’ADNc Tyrosine Amino Transférase (TAT) de Rat, par PCR et son sousclonage dans le vecteur d’expression pGEM-T Amplification de l’ADNc Tyrosine Amino Transférase (TAT) de Rat, par PCR et son sous-clonage dans le vecteur d’expression pGEM-T. I) Introduction : L’objectif de ce Tp est de sous cloner l’ADNcomplémentaire à l’ARNm codant pour la Tyrosine Amino Transférase de Rat. Pour cela, l’ADNc sera inséré dans un plasmide et pourra donc

bTexte 3:Le petit chaperon rouge PCR de Charles perrault a ete publié en 1967 ds le receuil Histoire ou contes du temps passé avec des moralité.Ce conte s'inscrit ds l'argument° indirect. Genre = apologue=cour reict a visée didactique L 1-18 → le recit de PCR (petite fille qui doit se rendre chez sa GM pr lui aporter un panier de victuailles & qui rencontre un loup.) Moralité → renferme lenseignement du conte. I-Un recit pour persuader

méthylation intervient dans l’inactivation des gènes d’un des deux chromosomes X chez la femme. Chez l’homme (XY), les gènes du chromosome X sont actifs. Un fragment de 600 pb d'un gène du chromosome X est amplifié par PCR à partir d'ADN génomique de cellules sanguines. Les produits de PCR sont ensuite digérés par l'une des deux enzymes. Lorsque le gène est inactif, tous les sites de restriction sont méthylés. Après digestion complète et séparation sur gel d’électrophorèse coloré au bromure d’éthidium

endonucléases de restriction et la technique d’amplification PCR. ➢ L’extraction plasmidique va permettre de vérifier que la bactérie a bien été transformée par un vecteur plasmidique. Suite à l’extraction, une digestion par des endonucléases de restriction va permettre de vérifier que le fragment d’ADN ESR1 a bien été cloné dans le vecteur plasmidique pour donner la construction génétique souhaitée (appelée pGFP- ESR1). ➢ La PCR va permettre de vérifier à partir d'une amplification de clone

de Schmallenberg touche les ruminants. Les études sérologiques montrent qu’il ne s’agit pas d’un agent zoonotique. Chez les animaux, le virus se transmet par des insectes vecteurs ainsi que verticalement in utero. Hôtes   Confirmation par la PCR ou l’isolement du virus : o bovins, ovins et caprins o bisons Confirmation sérologique uniquement : o cerfs élaphes o chevreuils d’Europe o alpagas o mouflons Homme : les études épidémiologiques et virologiques de populations humaines jugées à risque

spécifique à un microorganisme ciblé. Ces méthodes sont aujourd’hui de moins en moins couteûses car de plus en plus utilisées par les industriels. Elles présentent l’avantage d’être très rapides (quelques heures), précises et automatisées. La technique PCR (Polymerase Chain Reaction) imaginée par K.MULLIS en 1985, consiste à dupliquer de façon exponentielle un fragment d’ADN contenu dans un echantillon jusqu’à en obtenir suffisamment pour visualiser l’ADN par fluorescence. C’est un fonctionnement par

ont fait l‘objet d‘une analyse microbiologique pour déterminer leur diversité en bactéries lactiques. 300 bactéries lactiques ont été isolées et identifiées par des méthodes biochimiques (API50 CHL), moléculaires (SDS-PAGE) et génotypiques ((GTG)5-PCR et séquençage du gène codant pour l‘ARNt phenylalanine synthase PheS). Cette étude a montré que l‘identification fiable des 300 isolats a nécessité l‘utilisation d‘une approche polyphasique incluant des techniques moléculaires de pointes et des logiciels

de polymorphismes : un polymorphisme de séquence (par exemple mutation ponctuelle, délétion) et un polymorphisme de longueur de séquence (portion de gène en plus ou en moins) Au cours de ce TP, nous avons étudié, en utilisant la technique de PCR, le polymorphisme de deux gènes d’huîtres creuses Crassostrea gigas : un gène nucléaire, la métallothionéine (MT) et un gène mitochondrial du cytochrome Oxydase I (COI). Cette étude sera réalisée à partir de l’ADN présent dans des branchies d’huitres