Plasmide Ti

multiplier la construction. Cette opération est réalisée en introduisant celle-ci dans un plasmide doté d'une séquence qui lui permettra de se répliquer de façon autonome dans une bactérie-hôte. La modification génétique d'un organisme se fait par deux approches : 1. Le transfert direct La transformation directe consiste en l'introduction dans le génome d'un gène véhiculé le plus souvent par un plasmide classique (exemple : pUC), par le biais de techniques physico-chimiques. La première méthode

concentré en ions Ca la structure des membranes cellulaire va être altéré et il y aura la création de plusieurs micro perforations par lesquels l’ADN pourra pénétrer les cellules vont être capables d’ingérer des petites molécules d’ADN, comme un plasmide. Toutes les opérations ont été effectuées à 4°C afin de ne pas endommager les bactéries. . 2) Transformation des cellules compétentes Dans cette étape nous avons mélangé les cellules d’E.coli rendues artificiellement compétente avec de l’ADN

surtout sur les manipulations qui aboutissent a l’obtention des clones de ce fragment .Une digestion de l’ADN du bactériophage lambda et du plasmide (pBluescript) s’est faite par des enzymes de restriction au début de l’expérience afin d’obtenir plusieurs fragments à bouts cohésifs. Une ligation est réalisée entre les fragments afin d’obtenir des plasmides recombinés. C es derniers ont été introduits dans des bactéries thermo-compétentes pour le clonage. Afin de bien vérifier la réussite des pratiques

introduit, tout d’abord, le gène étranger dans un plasmide (ADN bactérien). On utilise pour cela différentes enzymes, notamment la ligase ou une enzyme de restriction qui agit de la même maniè-re. Sous son action, l’ADN est incorporé dans le plasmide lui conférant ainsi de nouvelles caractéristi-ques. C’est alors que l’on obtient un plasmide génétiquement modifié comprenant le gène étranger. * 2ème étape :   Ensuite, on transfère ce plasmide dans une bactérie, provenant en général de l’espèce

d’anticorps ainsi que la quantité insuffisante des GTPases Rho endogènes pour mettre en évidence ces liaisons. Il est possible de tester la deuxième hypothèse en sur-exprimant les GTPases Rho par transfection de cellules eucaryotes avec des plasmides codant ces protéines de manière à augmenter leur concentration intracellulaire. Le but de mon stage consiste donc à purifier les scFv à partir de cultures de bactéries Escherichia coli, de valider mes préparations de fragments d’anticorps sur

gène dans lequel il y a eu une insertion d’ADN (IS), mais également les gènes situés en aval qui dépendent du même promoteur, car l’élément inséré contient des signaux d’arrêt de la transcription). - De l’augmentation de la taille de certains plasmides (due également à l’insertion d’ADN (IS). Il existe deux types d’éléments génétiques transposables (ET) : - les séquences d’insertion (IS) - les transposons (Tn) Ce sont des éléments constitués d’ADN pouvant se déplacer d’un

pathogène, sa résistance aux défenses immunitaires humaines ont été encore diminuées ses composants de surface et son équipement enzymatique favorisent l’adhésion, la conservation et l’expression du plasmide dépourvue de plasmides naturels, elle ne peut pas, non plus, après transformation, échanger le plasmide avec d’autres bactéries, ses besoins nutritifs stricts l’empêchent de se développer hors de son milieu de culture au laboratoire, Expliquer l’intérêt des particularités de la souche bactérienne

d'ADN. 3. Quelques applications du génie génétique * la production de l'insuline humaine par des bactéries modifiées par génie génétique (Bordas p 180): repérage du gène, excision, multiplication, insertion dans un vecteur (plasmide de levure), puis insertion des plasmides transgéniques dans des bactéries dont certaines deviennent transgéniques et produisent l'insuline. La souche bactérienne modifiée (transgénique) fait l'objet d'un brevet. * les OGM sont des organismes génétiquement modifiés (Bordas

en introduisant le gène de la B galactosidase (une partie de l’opéron lac) 4-3-Lamda comme vecteur Ces propriétés du bactériophage ont permis de concevoir un nouveau vecteur à partir de [pic]capable de transporter plus d'ADN étranger que les plasmides pBR et pUC. La région b1 puisqu'elle n'est pas essentielle peut être remplacée par un fragment d'ADN d'une taille équivalente. On a alors un vecteur [pic]de remplacement de taille voisine de celle du génome naturel du bactériophage. On peut également

expérimentalement. Le promoteur est cloné dans un plasmide contenant un gène rapporteur. A partir de ce premier plasmide recombinant, d’autres plasmides ont été construits. Ils portent des mutations d’éléments en cis présents dans le promoteur dénommés boîtes a et b. La figure ci-dessous montre la structure schématique du promoteur avec les éléments en cis. Les mutations des éléments en cis sont représentées par des croix. Les différents plasmides sont transfectés dans des cellules en culture qui