Plasmide Ti

première étape consiste à préparer du plasmide puis à incorporer plusieurs gènes provenant de tout organisme vivant, animal, bactérie ou plante. Lorsque les plasmide est prêt, on l'insère dans la bactérie. On cultive ensuite cette bactérie qui va se reproduire très rapidement pour former de nombreuses autres bactéries qui possèdent toutes le plasmide incorporé. Après le développement des bactéries, il faut isoler les plasmides clonés. Pour transférer les plasmides dans des cellules végétales, on peut

Identifier et isoler le gène d'intérêt Obtention d'un mélange de fragments d'ADN. Identification d'un gène dans un mélange de fragments Réaliser et amplifier une construction génique Insertion d'un fragment d'ADN dans un plasmide Introduction du plasmide modifié dans le génome de la cellule hôte. Transférer de l'ADN Introduction d'un ADN étranger ou remplacement d'un fragment d'ADN Contrôler l'efficacité du transfert chez l'hôte Sélectionner des cellules

représenté par un double brin d’ADN circulaire. Le génome est parfois complété par des anneaux d’ADN supplémentaires plus petits : ce sont les plasmides. Ils offrent au monde bactérien des possibilités extraordinaires d’adaptation car ils sont souvent transmissibles d’une cellule à l’autre. Les bactéries échangent entre elles des portions de séquences d’ADN ou de plasmides qui peuvent s’intégrer complètement dans le génome de la bactérie receveuse. C\ Les cils et les flagelles. Ils sont

biologie moléculaire qui Le clonage consiste à insérer un segment d'ADN étranger dans une petite molécule capable de se répliquer de façon autonome. Ce type de molécule d'ADN est appelé un vecteur de clonage. Un vecteur de clonage courant est le plasmide bactérien. Il existe 2 types de clonage :le clonage directionnel qui consiste à insérer le fragment dans un sens et le clonage non orienté qui consiste a inséré dans le fragment dans les 2 sesns. II -En pratique : 2 . Amplification in vitro du

enzyme de restriction • Des vecteurs de gènes, les plasmides bactériens sont des petites molécules d'ADN circulaire, très fréquentes chez les Bactéries. Par ouverture d'un plasmide par une enzyme de restriction, on peut fabriquer de l'ADN recombinant. Pour cela on prélève un gène intéressant chez une autre espèce par action de la même enzyme de restriction. Le fragment d'ADN (ou gène d'intérêt) obtenu est ensuite introduit dans le plasmide. Une ADN ligase, agissant comme de la colle, permet de

sont une révolution dans les secteurs médical et agricole. Historique Les premiers pas Les premiers OGM sont des bactéries transgéniques. La première tentative de transgénèse par l’américain Paul Berg et ses collaborateurs en 1972. En 1977, le plasmide de la bactérie Agrobacterium tumefaciens est identifié. En 1978, un gène humain codant l’insuline est introduit dans la bactérie Escherichia coli. En 1982, le premier animal (souris) génétiquement modifié est obtenu. En 1983, le premier végétal

dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 4 Phages: Virus pour bactérie Le bactériophage lambda est un virus d'E. coli 5 Phages: Virus pour bactérie 6 Génome du phage lambda Le phage lambda possède au niveau de sa tête un génome de sous forme d'ADN double brin linéaire de 48,5kb 7 Objectif du TP Cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 8 Principe du TP Jour 1 HindIII EcoRI HindIII Vecteur (plasmide) EcoRI ADN génomique

Titre : Sous-Clonage d’un fragment d’ADN dans un vecteur bactérien Matériel biologique : Plasmide PSK Plasmide PCR-gai Enzymes de restriction : EcoRI, HindIII, Xho Introduction : Le clonage d'un gène est une grande technique en biologie moléculaire, c'est une opération consistant à isoler un gène, l'introduire dans un vecteur et à le reproduire en grande quantité. Parfois il est nécessaire d’effectuer un sous clonage permettant d’insérer dans un nouveau vecteur un fragment d'ADN de l’insert

un plasmide, fragment d’ADN circulaire qui est utilisé comme vecteur pour transporter le gène d’intérêt dans les cellules de la plante à modifier. 4 – On insère ensuite le gène d’intérêt dans le plasmide. 5 – Le plasmide est introduit dans une autre bactérie. 6 – Des colonies des bactéries (E.coli) modifiés sont mises en culture. Ensuite les chercheurs ont le choix entre deux techniques. Par bombardement de microbilles de tungstène tungstè Par transfert de plasmides 1 – Les plasmides créés

étape consiste à cloner le gène YFG dans un plasmide. Un plasmide est une petite molécule d'ADN circulaire qui se multiplie en même temps que les chromosomes. Pour obtenir de grandes quantités de ce plasmide celui-ci est tout d'abord introduit dans une bactérie -E. coli-(l'avantage d' E. coli est qu'elle se multiplie très rapidement). Généralement un antibiotique est utilisé pour ne permettre la croissance que des bactéries qui ont reçu le plasmide (le plasmide porte un gène de résistance à l'antibiotique)