Plasmide Ti

l’ADNc sera inséré dans un plasmide et pourra donc être transcrit in vitro en ARN qui sera utilisé comme sonde pour étudier l’expression du gène TAT. A A Souche ayant intégré le plasmide non recombinant, elle est résistante à l’ampicilline et possède, la partie NH2terminale au niveau du plasmide et C terminale au niveau de l’ADN bactérien, de la protéine βGalactosidase. Cette souche pourra dégrader le X-Gal en Gal+X(de couleur bleue) Souche ayant intégré le plasmide recombinant, elle est résistante

Clonage de molécules d'ADN du phage l à l'aide de plasmides pBluescript et de bactéries Escherichia coli. Résumé Le clonage consiste à isoler un fragment d'ADN, l'introduire dans un vecteur et le reproduire en grand nombre. Cette technique permet de produire des molécules trop complexe à synthétiser par voie chimique et offre une alternative plus intéressante. Ici, par utilisation de plasmide pBluescript nous souhaitions obtenir plusieurs clones d'une molécule d'ADN. Pour se faire, grâce aux

assez simple à mettre en place. Elle consiste a envoyé des chocs électriques dans un mélange composé de protoplaste et d’ADN. Ces chocs vont faciliter le passage de l’ADN dans le noyau des protoplastes. C’est derniers baignent dans une solution de plasmides. Une fois que l’ADN a pénétré dans la cellule celle-ci se trouve modifié génétiquement. C’est grâce au caractère réversible des pores que cette action st possible mais n envoyant un choc trop important la cellule ne reprend pas sa forme initial.

moléculaire : plantes model, arabidopsis taliana Plante qui se transforme bien par agrobacterium tumefaciens Bon outil de recherche dans le monde végétal 1 Biotechnologies animales et végétale SLO6-BC01 Carte de l’ADN-T du plasmide pKY70GIN ADN-T  Porte par le plasmide pKY70GIN LB  Bordure gauche Le promoteur 70S (double 35S : augmente l’expression), c’est un promoteur de virus (CAMV)  Fort  Constitutif  Ubiquitaire Le gène GUS : gène rapporteur     Permet de visualisé son expression

étape consiste à cloner le gène YFG dans un plasmide. Un plasmide est une petite molecule d'ADN circulaire qui se multiplie en même temps que les chromosomes. Pour obtenir de grandes quantités de ce plasmide celui-ci est tout d'abord introduit dans une bactérie -E. coli-(l'avantage d' E. Coli est qu'elle se multiplie très rapidement). Généralement un antibiotique est utilisé pour ne permettre la croissance que des bactéries qui ont reçu le plasmide (le plasmide porte un gène de resistance à l'antibiotique)

IUP BIOINGENIERIE OPTION 1 2ème ANNEE Introduction A. Construction du vecteur pUT 807 I. Présentation des plasmides 1. Plasmide pUT 599 2. Plasmide pUT 654 3. Plasmide pUT 807 4. Intérêt du plasmide pUT 807 II. Principe des méthodes utilisées. 1. La PCR 2. Intérêt de la PCR et conditions opératoires 3. Réactions enzymatiques : restriction

nécessaire quotidiennement (l'insuline par exemple, utilisée par de nombreuses personnes). Pour réaliser ce clonage moléculaire nous avons réalisés plusieurs étapes importantes telles que la digestion enzymatique, insertion dans un vecteur de clonage (plasmide), électrophorèse, extraction de l'ADN,... Introduction : Le clonage est la multiplication en grand nombre d'un gène, d'un organise ou d'une cellule souche. Il est très important de nos jours, en effet il nous permet d'obtenir en grande quantité

introduit l’ADN à l’aide d’une bactérie agrobacterium tumefaciens. Elle infecte les plantes et forme une tumeur. La bactérie possède un plasmide où l’on a une zone qui peut s’intégrer dans l’ADN dans la plante par transfert, l’ADN T. On va éliminer l’ADN T avec des enzymes de restriction, on parle de plasmide désarmé et, on va introduire le gène d’intérêt. On remet le plasmide d’intérêt dans la bactérie et par transfert le gène va se retrouver dans la plante. La construction génique On va ajouter

           Pour transférer les plasmides on utilise une autre espèce de bactérie du nom de Agrobacterium tumefaciens. Cette bactérie peut en effet introduire des fragments précis de son ADN dans le génome d'une plante. On doit donc transférer le plasmide entre  les bactéries Escherichia Coli et les bactéries Agrobacterium tumefaciens avant de l'insérer dans les plantes.              On utilise pour cela la méthode par conjugaison (voir le schéma ci-dessous). Une fois les plasmides insérés dans la bactérie

Chapitre 3 : Transformation des bactéries avec l’ADN plasmide, purification et caractérisation de l’ADN plasmide Transformation des bactéries par l’ADN plasmide et purification de l’ADN plasmide Matériaux : 1 aliquot de 15µL d’ADN plasmide stérile (pGFP-actin à 12ng/µL) 200mL de milieu LB stérile à température ambiante (dans un erlenmeyer couvert de papier d’aluminium) 3 pétris gélose LB-ampicilline (50µg/mL) 1 pétri gélose LB 50mL de CaCl2 à 100mM, 4°C Solution saturée de bactéries DH5alpha