Protoplaste

croissance Culture in vitro 16 * Production d’hybrides interspécifiques Protoplastes : cellules débarrassées de leur paroi par traitement enzymatique (cellulases) Nagata et Takebe, 1970 Peuvent se diviser (suivant les conditions) et régénérer des plantes entières A l’aide de cations, les protoplastes fusionnent -> hybrides interspécifiques Culture in vitro 17 La première démonstration de fusion entre des protoplastes différents remonte aux travaux de Melchers et al., en 1978. Il recherchait

L’électroporation : L'électroporation est une des techniques les plus simples à mettre en œuvre. Elle consiste à soumettre un mélange de protoplastes et d'ADN à des chocs électriques. Le champ électrique provoque la déstabilisation de la membrane plasmique du protoplaste et conduit à l'ouverture des pores membranaires, facilitant ainsi le passage de l'ADN dans le noyau. Or, les protoplastes baignent dans une solution de plasmides. Ces derniers passent donc facilement dans la cellule qui se trouve à son tour génétiquement

microparticules enrobées d'ADN (biolistique) ; • soit l'introduction d'ADN dans des protoplastes, par action d'un agent chimique ou d'un champ électrique (électroporation). Les cellules issues de différents types de tissus végétaux peuvent être soumises à la transformation. Selon les espèces, ce seront des disques foliaires, des sections de tige, des cotylédons, des embryons, des microspores ou des protoplastes. Par exemple, chez le tabac et la tomate, on utilise des disques foliaires ; chez la

microparticules enrobées d'ADN (biolistique) ;      soit l'introduction d'ADN dans des protoplastes, par action d'un agent chimique ou d'un champ électrique (électroporation). Les cellules issues de différents types de tissus végétaux peuvent être soumises à la transformation. Selon les espèces, ce seront des disques foliaires, des sections de tige, des cotylédons, des embryons, des microspores ou des protoplastes. Par exemple, chez le tabac et la tomate, on utilise des disques foliaires ; chez la

Cellule animale : • Le protoplaste : grâce à sa paroi cellulaire, une cellule végétale peut garder sa forme et sa rigidité, en lui ôtant cette membrane la cellule prend une forme sphérique et le cytoplasme n est renfermé que par une membrane plasmique. Le protoplaste est le nom de cette nouvelle cellule. Il peut reprendre sa forme initiale en formant une nouvelle paroi cellulaire : Passage d’une cellule à un protoplaste par digestion enzymatique de la paroi.

transformées. 2) La transformation directe a. Le transfert direct dans les protoplastes Il y a 3 méthodes : Méthodes chimiques Méthodes physiques : l’électroporation Les liposomes b. La microinjection Elle peut être réalisée sur des cellules végétales et des protoplastes. Cf. Schéma TD Précédent. Grâce à cette technique, on peut obtenir une centaine de protoplastes par jour avec un taux de réussite supérieur à 60%. c. La biolistique Le mot

* Cellules isolées et protoplastes * Cellules isolées : * Obtention de cals * Séparation dans un milieu liquide agité * Récupération des cellules par filtration Photographie [ 1 ]cellule produit à partir d'un embryon de blé * Protoplastes obtenus par digestion enzymatique. Tissu différencié => Plasmolyse + dissociation des cellules (fragmentations mécanique + pectinase) => CELLULASE + PECTINASE en milieu isotonique => Protoplastes (récupérable par centrifugation)

L'électroporation : L'électroporation est une des techniques les plus simples à mettre en œuvre. Elle consiste à soumettre un mélange de protoplastes et d'ADN à des chocs électriques.  Le champ électrique provoque la déstabilisation de la membrane plasmique du protoplaste et conduit à l'ouverture des pores membranaires, facilitant ainsi le passage de l'ADN dans le noyau. Or, les protoplastes baignent dans une solution de plasmides. Ces derniers passent dontc très facilement dans la cellule qui se trouve à son tour

1-      L’électroporation : L’électroporation est une des techniques les plus simples à mettre en œuvre. Elle consiste à soumettre un mélange de protoplastes (cellules végétales sans paroi) et d’ADN à des chocs électriques. Le champ électrique provoque alors la déstabilisation de la membrane, facilitant le passage de l’ADN  dans le noyau. Ces protoplastes baignent dans une solution de plasmides. Ces derniers passent donc très facilement dans la cellule qui se trouve à son tour génétiquement modifié

L’électroporation : L'électroporation est une des techniques les plus simples à mettre en œuvre. Elle consiste à soumettre un mélange de protoplastes et d'ADN à des chocs électriques. Le champ électrique provoque la déstabilisation de la membrane plasmique du protoplaste et conduit à l'ouverture des pores membranaires, facilitant ainsi le passage de l'ADN dans le noyau. Or, les protoplastes baignent dans une solution de plasmides. Ces derniers passent donc très facilement dans la cellule qui se trouve à son tour