Protoplaste

d’une plante, afin de la parasiter. - Le transfert direct, qui fait intervenir :  La projection d’ADN dans les cellules de la plante par l’utilisation d’un canon (projette des microparticules enrobées d’ADN)  L’introduction d’ADN dans ces protoplastes, par action d’un agent chimique ou d’un champ éléctrique. Les cellules issues de différents types de tissus végétaux peuvent être soumises à la transformation. Etape 3 : Régénérer et évaluer les plantes transformées Après sélection de cellules

plasmide recombiné est intégré à celle-ci et les protoplastes l’infecte ensuite vient l’intégration dans le noyau du gène tandis que dans la biolistique, l’on projette sur les tissus des microparticules de tungstène ou d’or enrobées d’ADN à l’aide d’un canon à particules 32. Qu’est-ce que l’électroporation ? L’ électroporation est l’introduction d’ADN dans des cellules (protoplastes, cellule débarrassée de sa paroi cellulaire), par

indirects Les techniques directs : Cela consiste a introduire dans l'ADN d'un gène, par le biais de techniques physico-chimiques. Il existe plusieurs techniques de transfert direct : -L'électroporation qui consiste à soumettre un mélange de protoplastes et d'ADN à des chocs électriques. -La micro-injection qui consiste a introduire directement le gène étranger dans la cellule à modifier,a l'aide d'un micromanipulateur monté avec un microscope. -La biolistique qui elle consiste aà propulser le

organisme vivant afin que l'organisme présentera une nouvelle propriété et de transmettre ces biens à sa progéniture. La transgénèse peut être facilitée par des liposomes, vecteurs plasmidiques, vecteurs viraux, injection pronucléaire, fusion de protoplastes, et l'injection d'ADN balistiques. Les organismes transgéniques sont capables d'exprimer des gènes étrangers parce que le code génétique est le même pour tous les organismes. Cela signifie qu'une séquence d'ADN spécifique de code pour la même protéine

solution hypertonique |dont la cellulose et les | | |-Les expériences faites en TP qui confirment ces deux zones et qui mettent en évidence la zone d’élongation.|- Observation de documents sur les protoplastes|hémicelluloses. | | |(vidéo) | |

électriques. Une fois éprouvées sur des cellules animales, ces méthodes ont été testées sur des protoplastes. Transformation de protoplastes : [16]  par méthode chimique, en utilisant le polyéthyléneglycol (PEG), une molécule capable d'induire la déstabilisation de la membrane plasmique et qui permet le transfert d'ADN à travers celle-ci ;  par méthode physique, en réalisant la fusion entre des protoplastes et des liposomes (vésicules artificielles de phospholipides encapsulant l'ADN à transférer)

transgénèse. Les techniques les plus utilisées sont : • L'électroporation : Technique simple à mettre en œuvre. On soumet un mélange composé de protoplastes et d'ADN à des chocs électriques. Le champ électrique dans le mélange provoque l'ouverture des pores membranaires du protoplaste et permet ainsi le passage de l'ADN dans le noyau Les protoplastes baignent dans une solution de plasmides. Ces derniers passent donc dans la cellule qui se retrouve donc génétiquement modifiée. Tout cela est possible

biotechnologies du génie génétique permettent d'agir directement sur le génome des plantes cultivées: mutagenèse :suppression de gènes pour diminuer la concentration en protéines allergènes par exemple. hybridation de deux espèces par fusion de protoplastes: cellules végétales dont la paroi a été digérée et que l’on fait fusionner. (voir TP) =>constitution de nouvelles espèces hybrides transgénèse :implantation de gènes améliorants->OGM (voir document 5 de cours)      

L'électroporation est une des techniques les plus simples à mettre en œuvre. Elle consiste à soumettre un mélange de protoplastes et d'ADN à des chocs électriques. Le champ électrique provoque la déstabilisation de la membrane plasmique du protoplaste et conduit à l'ouverture des pores membranaires, facilitant ainsi le passage de l'ADN dans le noyau. Or, les protoplastes baignent dans une solution de plasmides. Ces derniers passent donc très facilement dans la cellule qui se trouve à

l'organisme. On distingue 2 grands types de modifications du patrimoine génétique: - dans l'un, les modifications induites sont transmises à la descendance grâce à la transfection (= insertion d'un ou plusieurs gènes dans le génome des cellules) des protoplastes pour les végétaux et de la cellule-oeuf pour les animaux pluricellulaires, il s'agit de la transgenèse dans son sens propre; - dans l'autre, appliqué seulement chez les animaux pluricellulaires, seules certaines cellules ou certains tissus sont