Taq polymérase

recombinantes. Une large place est laissée aux TP: Les étudiants réalisent une extraction d'ADN génomique et analysent par PCR le polymorphisme du gène de l'amélogénine (détermination du sexe). Ils produisent et purifient une protéine recombinante, la Taq ADN Polymérase, et testent au final l'activité de l'enzyme ainsi produite. X4B0060 Biochimie 2 : Enzymologie et métabolisme Enzymologie: Propriétés générales des enzymes, cinétique des réactions enzymatique, les effecteurs de l’activité enzymatique, régulation

divers processus industriels ont été isolées de micro-organismes. Les enzymes des détergents sont des protéases de certaines souches de Bacillus. Des amylases capables d’hydrolyser l’amidon sont très utilisées dans l’industrie alimentaire. La Taq polymérase utilisée dans les réactions de polymérisation en chaîne (PCR) pour l’amplification de l’ADN provient d’une bactérie thermophile Thermus aquaticus. Les bactéries génétiquement modifiées sont très utilisées pour la production de produits pharmaceutiques

déshydrogénase MTDH: mannitol déshydrogénase PCA : acide perchlorique PCR : amplification en chaîne par polymérase PC : phosphatidyl choline PE : phosphatidyl éthanolamine PG : phosphatidyl glycérol PI : phosphatidyl inositol PPP : voie des pentoses phosphates PR (protéine) : protéine associée à la pathogenèse PS : phosphatidyl sérine ORF : cadre ouvert de lecture Q-PCR : amplification en chaîne par polymérase quantitative RMN : résonance magnétique nucléaire ROS : espèce activée de l‟oxygène SD : déviation

–20°C, l’ADN est centrifugé 10mn à 20 000g puis lavé avec 750µl d’éthanol 70%. Après séchage, l’ADN est repris dans 40µl de TE (10mM Tris pH 8, 1mM EDTA pH 7,2) additionné de 0,5µl de RNase A. • PCR : Les PCR ont été effectuées en utilisant la Taq polymérase (taux d’erreur 2.10-5). Le génome de Dictyostelium discoideum étant très riche en A et T, j’ai dû fortement diminuer la température d’élongation (68°C en général). • Transformation de Dictyostelium : Les cellules sont transformées par électroporation