Tp Electrophorese

PONTILLE Laura VELUD LoicGROUPE : A2 TP BIOLOGIE MOLECULAIRE 1 2014-2015 SEPARATION D’ADN PAR ELECTROPHORESE ANALYTIQUE ET PREPARATIVE OBJECTIF. Le but de ce TP est de purifier l’ADN plasmidique de pUC18-wzc ; d’en établir sa carte de restriction et de calculer le rendement de l’extraction du gène wzc. Pour cela, on fera agir différentes enzymes de restriction sur cet ADN plasmidique puis on réalisera une migration sur gel d’agarose. Pour finir, nous déterminerons la quantité de gène

égal au nombre de charges négatives, la protéine possède une charge globale nulle et ne migre pas lorsqu’elle est soumise à un champ électrique, c’est le point isoélectrique (pI). –  Les électrophorèses des protéines sériques de routine sont en général réalisées en milieu alcalin (pH > 8, >9.5 en électrophorèse capillaire), les protéines sont donc chargées négativement. www.admed-ne.ch Electromigration Toute espèce chargée en solution et soumise à un champ électrique E se déplace à une vitesse

de restriction BamHI et/ou EcoRI à 1unité.µL-1, en fonction des échantillons : * pGEX + RNase * pGEX + EcoRI * pGEX + RNase + EcoRI * pGEX-IDH + RNase * pGEX-IDH + RNase + EcoRI * pGEX-IDH + RNase + EcoRI + BamHI * Electrophorèse horizontale en gel d’agarose : L’ADN plasmidique est chargé négativement : entraîné par un champ électrique, il migre vers l’anode (pôle positif). Le gel d’agarose constitue un réseau de mailles permettant de séparer des composés en fonction

stationnaire et mobile utilisées (échange d’ions, partage en phases normale et inverse, adsorption, exclusion...), l’EC regroupe un grand nombre de modes selon la nature de l’électrolyte de séparation et du capillaire utilisé (électrophorèse de zone, électrophorèse micellaire, électrophorèse sur gel, isoélectrofocalisation, électrochromatographie). L’EC est une méthode d’analyse désormais reconnue en raison de ces qualités intrinsèques : efficacité et résolution élevées, rapidité et automatisation des séparations

d’un échantillon témoin connu. Cela concerne l’analyse de constituants chimiques porteurs de charges électriques. Cette technique peut être utilisée pour « trier » deux types de molécules : des protéines, ou des fragments d'ADN. A) ELECTROPHORESE DES PROTEINES. Les protéines sont des molécules chargées électriquement, les acides aminés constitutifs comprenant des radicaux électronégatifs et électropositifs, leur donnant des propriétés variables selon qu’ils sont placés dans des

ELECTROPHORESE DES HEMOGLOBINES SUR BANDES D’ACETATE. PROTOCOLE EN IMAGES Introduction • L'électrophorèse est une technique biochimique de séparation fondée sur le fait que des molécules portant des charges électriques différentes migrent  à des vitesses différentes lorsqu'elles sont placées dans un champ électrique. • Si l’idée d’utiliser cette caractéristique pour séparer des molécules remonte à la fin du dix-neuvième siècle, c'est le biochimiste suédois Arne Tiselius (1902-1971)

E E A E C Home | News | Hacking | Sciences | Technology | Ti 92 | Programming | Free articles | Links | Webmaster PURIFICATION DU LYSOZYME DE BLANC D’OEUF PAR CHROMATOGRAPHIE D’ECHANGE D’IONS ET CONTROLE DE L’HOMOGENEITE DU LYSOZYME PAR ELECTROPHORESE SUR GEL DE POLYACRYLAMIDE EN PRESENCE DE SDS S K E L E T O N Ä Castry Glwadys and Delbé Lionel Ä Licence de biologie générale Université des Antilles Guyane faculté des sciences Ä Travaux pratique de biochimie assuré par Th.MARIANNE

ajoute 4 µL de solution de dépôt aux échantillons, contenant : du glycérol 50% (alourdisseur), de l’EDTA (neutralisation des DNases), ainsi que du bleu de bromophénol et du bleu de xylène de cyanol, marqueurs de suivi de la migration. I.2- Electrophorèse horizontale en gel d’agarose L’ADN plasmidique est chargé négativement : entraîné par un champ électrique, il migre vers l’anode (pôle positif). Le gel d’agarose constitue un réseau de mailles permettant de séparer des composés en fonction de

ils ne peuvent être séparés qu’en utilisant 2 champs électriques appliqués de façon alternative. D e ce fait, l’électrophorèse en champ pulsé constitue une technique de choix pour la caractérisation de ces différentes souches de levure I- BUT DU TP A l’aide de l’électrophorèse en champ pulsé, on va établir le caryotype de différentes souches de levure (Saccharomyces cerevisiae, S.bayanus et S. pastorianus), puis identifier chacune d’elles en analysant leur profil électrophorétique en le comparant

Objectif du TP Cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 4 Phages: Virus pour bactérie Le bactériophage lambda est un virus d'E. coli 5 Phages: Virus pour bactérie 6 Génome du phage lambda Le phage lambda possède au niveau de sa tête un génome de sous forme d'ADN double brin linéaire de 48,5kb 7 Objectif du TP Cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 8 Principe du TP Jour 1