Tp Phosphatase Alcaline

de déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme afin d’étudier l’influence de la concentration en substrat et de la présence d’un inhibiteur sur la vitesse de réaction. Dans ce TP, nous allons utiliser une préparation commerciale de phosphatase alcaline de veau. Il s’agit d’une enzyme alcaline à 2 substrats, capable d’hydrolyser les monoesters phosphoriques selon la réaction suivante : R-O-PO3 2- + H2O R-OH + HPO4 2- II. Principe Afin de suivre la réaction

DETERMINATION DU pH OPTIMUM DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation de phosphate minéral et d'un alcool ou d'un phénol, selon la réaction : R-O-PO32- + H2O  R-OH + HPO42- Méthodologie La manipulation permet l'étude de l'influence de plusieurs facteurs sur la réaction enzymatique. L'enzyme utilisée est une préparation commerciale partiellement purifiée de phosphatase intestinale de veau, la réaction

___________________________________________________________________ Page | 1 ETUDE CINETIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases (EC 3.1.3.1) sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation d’un ion phosphate et d'un alcool (ou d’un phénol), selon la réaction : R-O-PO3 2- + H2O  R-OH + HPO4 2- Méthodologie Le but du TP est d’étudier l’influence de la concentration de initiale substrat ([S]0) et d’enzyme totale ([E]0) sur la

La Phosphatase alcaline Le but du TP Nous voulons étudier la Phosphatase alcaline. Nous voulons observer ce que devient son activité lorsque l’on fait varier différents facteurs, comme la concentration en substrat initiale dans une première partie, et le pH dans une seconde. Pour s'intéresser à son activité, on se servira du calcul de son activité spécifique dans une situation donnée, et de certaines représentations de la vitesse de réaction en fonction de la concentration en substrat, ou en fonction

Commande nerveuse Activation musculaire (potentiels d'action) Phénomènes physiologiques Relargage du Calcium (reticulum sarcoplasmique) Métabolisme anaérobie alactique Métabolisme anaérobie lactique ATP Resynthèse de l'ATP ATP Hydrolyse de Pi + ADP l'ATP ( Myosine-ATPase) Métabolisme aérobie Pi + ADP Phénomènes biochimiques V0 F0 Pmax Phénomènes mécaniques Métabolisme anaérobie alactique Deux réactions métaboliques, qui ne nécessitent pas la présence d'oxygène

ÉTUDE CINÉTIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DÉTERMINATION DU pH OPTIMUM BUT: Connaître les caractéristiques de la phosphatase alcaline tels que la Vm, le Km et le pH optimum. Lors de ce T.P. On étudiera donc les propriétés phosphatase et alcaline de cette enzyme. Une phosphatase est une enzyme qui hydrolyse un monoester phosphorique et forme un phosphate et un alcool ou un phénol: R-O-PO32- + H2O → R-OH + HPO42- Pour connaître le Vm et le Km de cette enzyme, on a besoin

TP ENZYMOLOGIE ETUDE CINETIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DETERMINATION DU PH OPTIMUM Introduction Les phosphatases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques. Ici, on étudiera les effets de l’enzyme sur le PNPP. La phosphatase alcaline hydrolyse le PNPP suivant la réaction suivante : PNPP + H2O PNP Cette réaction libère du PNP. Le PNPP est incolore, alors que le PNP est jaune en milieu alcalin, ce qui permet de le doser directement par spectrophotométrie à 410nm

Etude expérimentale de la phosphatase alcaline I. BUT : Etude cinétique de l’activité enzymatique d’une enzyme la phosphatase alcaline .On procède à :  Une étude cinétique de la libération des produits de la réaction.  Etude de l’influence de la concentration de substrat(PNPP) sur la vitesse de la réaction.  Etude d’un phénomène de compétition entre deux substrats. II. PRINCIPE :  L’ étude cinétique de la libération des produits de la réaction

TP : étude expérimentale de la phosphatase alcaline But Nous cherchons à déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme, la phosphatase alcaline, en présence d’un ou de deux substrats. Pour cela nous avons, dans un premier temps, étudié l’activité de cette enzyme en présence de différentes concentrations d’un seul substrat. Ce qui nous a ensuite permis de l’étudier en présence de deux substrats. Principe Le p-nitrophényl phosphate (PNPP), qui sera notre premier substrat, est un composé

Titrage d’un sérum de lapin par ELISA Le but de ce TP est de mettre en évidence, dans le sérum d’un lapin préalablement immunisé par la BSA, la présence d’anticorps spécifiques anti-BSA et de titrer la réaction par la technique de l’ELISA. Le TEST ELISA : L’ELISA est un test qui permet d’analyser les réactions antigène / anticorps. Pour réaliser ce test on utilise une plaque de microtitrage ELISA composés de 96 puits à fond plat. On va venir fixer sur celle-ci l’antigène. Cette technique