Transfection

experiments, we used a (-catenin form (S45Y) which is mutated in serine 45, the phosphorylation target site. This (-catenin form in not phosphorylated, escape degradation, is present continuously into the nucleus and is constitutively active. The transfection of this mutated form together with Edar or its adapter EDARADD inhibit severely its transcriptional activity. We further confirmed the inhibition of Wnt/(-catenin signalling by Edar in two cancerous cell lines where the endogenous (-catenin is

puits car la SIRP est difficile à isoler. Les protéines ont été séparées sur SDS-PAGE 7,5%. Les Western Blot ont été effectués avec les anticorps spécifiques aux expériences. Les membranes on été révélées en utilisant un kit ECL fait maison. Transfection transitoire des cellules HEK 293 – les cellules ont été transfectées par la technique du Phosphate de Calcium avec 1(g de shARN 14, 17, 54 ou 57. Etablissement de lignée cellulaire stable – 400 000 cellules Hc11 ont été transfectées par la technique

OGM Sommaire : I- Qu’est-ce qu’un OGM ? II- Histoire des OGM III- Pourquoi a-t-on fabriqué des OGM ? a) Avantages b)Inconvénient IV- Comment fabrique t-on un OGM ? a)Technique directe : L’électroporation. b)Technique indirecte : Transfection biologique. V- Quels sont les risques pour l’environnement et la santé ? VI- Quelle est la réglementation en vigueur ? VII- Conclusion. I- Qu’est-ce qu’un OGM ? Un Organisme Génétiquement Modifié (OGM) est un organisme (une plante

Techniques de transfert indirect : Le développement de la transgénèse végétale a connu son essor grâce à la découverte de bactéries telluriques* phytopathogènes : Agrobacterium tumefaciens et Agrobacterium rhizogenes. * La transfection biologique : La méthode de la transfection biologique utilise les propriétés de ces bactéries. C’est une méthode plus « naturelle » que celles que nous avons vues précédemment. Première étape : Tout d’abord, on introduit le gène d’intérêt dans un plasmide. Pour

Faire un schéma légendé du plasmide que l’on souhaite ainsi construire sur lequel figure les différents éléments mentionnés. 5- On introduit le vecteur d’expression ainsi construit dans une cellule de souris (cette opération porte le nom de « transfection » pour une cellule eucaryotes, le terme « transformation » étant généralement réservé aux cellules procaryotes). Faire un schéma d’une cellule transfectée par ce vecteur et indiquer les différentes étapes (et où elles s’effectuent dans la cellule)

cellules HCT116 de cancer du colon : on utilise les témoins (HCT116-WT), des cellules sans p53 (HCT116-p53-/-) et des cellules sans p21WAF1 (HCT116-p21-/-). On réalise un Western Blot sur des extraits de protéines nucléaires de ces cellules après transfection par des siARNs ciblants FOXF1. Les résultats sont exprimés dans les figures 1A et 1B. Fig.1. (A) Analyse de l’efficacité des siARNs FOXF1 pour inhiber l’expression des protéines FOXF1 endogènes. L’analyse par Western Blot a été réalisée sur

Introduction : 3 II- Présentation du laboratoire d’accueil : 4 III- Présentation du sujet de stage : 6 IV- Accueil et encadrement: 10 V- Matériels et Méthodes : 11 1. Culture cellulaire 11 2. Trypsination des cellules: 11 3. Transfection: 11 4. Immunofluorescence 12 5. Techniques de manipulation de protéines 13 a. La lyse cellulaire 13 b. Électrophorèse SDS-PAGE et immunodétection des protéines (western blot) 13 VI- Résultats : 14 1- Co-localisation de

expériences suivantes ont été réalisées pour tester cette hypothèse. -A) retard sur gel (figure 1). B) transfections (Figure 2). Le promoteur du gène PIGR contenant le motif E est inséré dans un plasmide en amont du gène de la luciférase (plasmide WT-PIGR). Le plasmide est co-transfecté dans des cellules intestinales avec un plasmide codant les facteurs USF ou MYC. 24h après transfection, l’activité luciférase est analysée (figure 2). -C) immuno-précipitation de chromatine (figure 3). Des

(habituellement des bactéries ou des levures, parfois d'autres cellules eucaryotes) qui ont été rendues perméables à l'ADN de façon transitoire. De telles cellules sont dites alors transformées par les plasmides (on parle aussi de transfection de cellules, voir TP transfection de cellules eucaryotes in vitro). Pour faciliter l'introduction d'un gène dans une bactérie, il faut rendre les bactéries compétentes en fragilisant leur paroi cellulaire. C'est ce que l'on fait par exemple lorsque l'on plonge

ferme transgéniques produits furent des moutons et des porcs en 1985. Les différents types de manipulation génétique : 1. L'électroporation. 2. La micro injection. 3. Thérapie génique. 4. Clonage thérapeutique. 5. La biolistique. 6. La transfection biologique. 7. La lipotransfection biologique. Je vais vous parler des 7 différentes manipulations génétiques qui sont représenté ci-dessus L’éléctroporation L'électroporation, c’est une autre méthode ou on introduit l’ADN dans les