Transfection

nombre croissant de gènes HOX D, allant de D9 jusqu'à D13. Ce qu’il faut comprendre ici : plus on s’éloigne du pouce (ou gros orteil) pour aller vers le petit doigt (ou petit orteil) plus on a besoin d’exprimer de gènes. Expérience de Morgan : transfection sur des embryons de poulet de façon à faire exprimer en continu le gène HOX D11. Résultat : le premier orteil antérieur disparaît pour faire place à 2 orteils N°2 (Explications : le 1er doigt nécessite l'expression isolée de D9+D10. Ici D11 s’exprime

agissant sur l’ARN, soit afin de rétablir une expression (saut d’exon), soit pour le dégrader (ARN interférence, ribozymes). Le transfert d’acides nucléiques dans les cellules nécessite un transporteur - ou vecteur. En effet, le contexte de transfection est pour le moins défavorable sans une vectorisation car l’ADN seul est une macromolécule fragile qui est peu internalisée par les cellules du fait de nombreuses barrières. Les pathologies visées par la thérapie génique Les essais cliniques

condition was also useful to determine which siRNA would be used between the four different sequences. The one that has 11 been chosen was able to induce a total suppression of the H19’s expression in 6 days and was effective during 9 days after transfection in Hep3B cells. So, the hypoxic stress is a good way to produce a high amount of siRNA using Hep3B cells transfected with siRNA and placed into hypoxic condition (this time without the use of CoCl2, but near 0% level of 02). 2.3. Ablation of

myelogenous leukemias. Mechanism of Tel/PDGFR oncogene activation DETECTION DES ONCOGENES • la possibilité de transformer les cellules grâce à des rétrovirus, ont poussé les auteurs à tester l'effet des Transfert de DNA : Technique de transfection pour l’étude des oncogènes • Trois éléments sont nécessaires pour réussir un transfert de DNA : -une cellule ne possédant pas le gène recherché, -une cellule possédant ce gène en abondance, -un moyen de sélectionner les cellules ayant reçu

humaines et de biopsies de BHP (hyperplasie prostatique bénigne) Analyse de l’expression d’IKCa1 : - RT-PCR : isolation d’ARN total, expériences RT-PCR, primers PCR (Genbank + Invitrogen) - Immunofluorescence Association d’IKCa1 et TRPV6 : - Transfection cellulaire de siRNA - Western Blot et immunoprécipitation Rôle dans la prolifération : - Prolifération et apoptose Mécanismes induits à cet effet : - la régulation de l’entrée de calcium : Mesures de [Ca2+]i (imagerie calcique) - l’hyperpolarisation :

Molecular cloning : isoler une partie définie de l’ADN et en faire des copies. Sert a augmenter les fragmentes d’ADN contenant les gènes. qRT-PCR (quantative reverse transcription polymerase chain reaction) : détermine la quantité – Amplifie Transfection : transfert des gènes = introduction d’Adn dans les cellules eucaryotes. (Uni pluri cellulaire+ noyau) TIRF – SARS VLP s: microscope fluorescent Cytometry : technique permettant de faire défiler des particules, molécules ou cellules a grande

donc encourageants. ´rapie ge ´nique 2.10.6. The ´ ´ ´ La therapie genique est seduisante dans ce contexte et la ´ transfection de l’alanine-glyoxylate aminotransferase dans des ´ ´ hepatocytes a permis quelques resultats encourageants [46,47]. Toutefois, dans le cas particulier de l’hyperoxalurie primitive de type 1, les vecteurs actuels ne permettent pas d’obtenir un taux de transfection suffisant (souhaitable de l’ordre de 100 %), ni les moyens d’assurer un adressage peroxysomal exclusif, et l’application

peut se diviser à T° élevée (35°C) Plasmides contenant des fragments d’ADN Clonés d’une levure sauvage TRANSFECTION Croissance et division de la cellule à T° élevée (35°C) : Compensation de l’anomalie du mutant cdc correspondant

précisément dans toutes les directions spatiales possibles et à analyser individuellement des cellules vivantes inférieures ou égales à quelques microns. Cette technique permet l’étude à l’échelle d’une cellule des effets d’une drogue ou de la transfection d’un gène ou encore la compréhension des interactions entre cellules… DES TRAITEMENTS PLUS EFFICACES Pouvoir distribuer un médicament à la dose adéquate, précisément sur l’organe ou le tissu infecté, est un véritable enjeu. Grâce aux nanotechnologies

Pour examiner l’efficacité des promoteurs dans les baculovirus recombinants, il faut étudier le taux d’expression du gène (EGFP) qui est sous le contrôle de ces promoteurs. Pour cela, les chercheurs ont procédé à l’expérience suivante : * Transfection des cellules S2 par le virus recombinant. * Incubation pendant 36h. * Lyse cellulaire. * Faire un Western Blot pour l’extrait cellulaire, en utilisant des Ac-anti EGFP. Le résultat est le suivant : Fig2A : Analyse par Western Blot