Transformation Plasmide Pbluescript

o57 DATE: GROUPE de TD: 9 CLONAGE DE MORCEAUX D'ADN DU PHAGE LAMBDA Résumé: Lors de ce TP de BIO 57, nous allons réaliser des clones de morceaux d'ADN du phage Lambda. Pour cela on utilise des vecteurs de clonages (içi un plasmide pBluescript) combinés avec notre ADN à cloner, on a donc des molécules recombinantes ,ou ADNrecombinants (vecteur + ADN lambda). Ensuite on les introduit dans des bactéries hôtes afin de les reproduire. Au final on obtient des clones d'ADN lambda avec son

dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 4 Phages: Virus pour bactérie Le bactériophage lambda est un virus d'E. coli 5 Phages: Virus pour bactérie 6 Génome du phage lambda Le phage lambda possède au niveau de sa tête un génome de sous forme d'ADN double brin linéaire de 48,5kb 7 Objectif du TP Cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 8 Principe du TP Jour 1 HindIII EcoRI HindIII Vecteur (plasmide) EcoRI ADN génomique

Etude du clonage dans le plasmide pBluescript de l’ADN du phage lambda. Mots clés : Enzyme de restriction, EcoR1, HindIII, vecteur de clonage, ADN recombinant, plasmide, pBluescript, électrophorèse, transformation, LacZ, bactérie, phage lambda. Résumé : L’ADN peut faire l’objet de multiples travaux. Ici notre objectif est de cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluescript. Pour se faire nous aurons recours à différentes techniques comme la digestion

Clonage de molécules d'ADN du phage l à l'aide de plasmides pBluescript et de bactéries Escherichia coli. Résumé Le clonage consiste à isoler un fragment d'ADN, l'introduire dans un vecteur et le reproduire en grand nombre. Cette technique permet de produire des molécules trop complexe à synthétiser par voie chimique et offre une alternative plus intéressante. Ici, par utilisation de plasmide pBluescript nous souhaitions obtenir plusieurs clones d'une molécule d'ADN. Pour se faire, grâce aux

dans un plasmide Pbluescript recombinant Email : Groupe 13 Résumer : Cet article à pour but de montrer comment cloner de l'ADN de phage λ avec comme vecteur un plasmide pbluescript. Nous avons pu voir au cour du TP comment utiliser les techniques de clonage moléculaire via un vecteur, la digestion enzymatique avec les enzyme EcoR1 et Hind III, la transgenèse par choc thermique, l'électrophorèse sur gel d'agarose, et la minipréparation a l'aide du kit d'extraction de plasmide. Les résultat

surtout sur les manipulations qui aboutissent a l’obtention des clones de ce fragment .Une digestion de l’ADN du bactériophage lambda et du plasmide (pBluescript) s’est faite par des enzymes de restriction au début de l’expérience afin d’obtenir plusieurs fragments à bouts cohésifs. Une ligation est réalisée entre les fragments afin d’obtenir des plasmides recombinés. C es derniers ont été introduits dans des bactéries thermo-compétentes pour le clonage. Afin de bien vérifier la réussite des pratiques

incubation de la boîte, que peut-on conclure ? Deux colonies d’aspect différentes seront utilisées pour effectuer une coloration de Gram. Travaux Pratiques de Microbiologie Générale MGG, LSV2 Fig.1 Méthode des stries 4 Fig. 2 Carte du plasmide pBS D) Préparation du TP2 a) Réplique sur tampon de velours. - Inoculer les 5 souches bactériennes (fournies par les enseignants) sur une boîte de milieu LB préalablement orientée et divisée en cinq secteurs. Cette boîte servira de "boîte mère"

préparé l'insert et le plasmide, que nous avons ligaturé. Les bactéries ont ensuite été rendues compétentes avant qu'elles ne soient transformées par le plasmide recombinant. Enfin ; nous avons procédé à l'analyse de notre produit de clonage. Introduction Le travail réalisé lors de ce TP aura pour but la réalisation d'un clonage, c'est à dire l'insertion d'un fragment d'ADN contenu dans un vecteur initial dans un autre vecteur puis la transformation de ce plasmide recombiné dans les bactéries

1966 1967 1970 1973 1975 1975-77 1981-83 1985 1990 Mendel propose le concept du gène et de la transmission héréditaire des caractères génétiques. Isolement de l'ADN pour la première fois par Friedrich Miescher. Griffith découvre le principe de la transformation bactérienne. Avery, McLeod et McCarty démontrent que l'ADN est porteur du message génétique. Hershey et Chase confirment les travaux d'Avery et convainquent la communauté scientifique. Watson et Crick proposent le modèle de la double hélice pour

.... 41 2.1 BIOLOGIE MOLECULAIRE ET CELLULAIRE .................................................................. 41 2.1.1 Souches utilisées............................................................................................... 41 2.1.2 Plasmides et constructions utilisés................................................................... 43 2.1.3 Sous-clonage .................................................................................................... 45 2.1.4 Techniques de biologie