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Biologie moléculaire

7327 mots 30 pages
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TP- Biologie Moléculaire

PLATEFORME BIO
CIME - nanotech

dans les locaux du BCAi
(Bâtiment des Composants Avancée de l'INP Grenoble)

3, PARVIS LOUIS NEEL

BP 257 / 38016 GRENOBLE Cedex 1

PLAN du TP-TD

Principe :
Il est organisé autour de  SNAP, une protéine soluble de Dictyostelium discoideum qui a été étudiée en TD de bioinformatique. On veut faire l’expression du fragment cytoplasmique avec une étiquette His6 dans un vecteur pQE30. Diverses techniques nécessaires au sous-clonage seront abordées :
PCR, digestion par des enzymes de restriction, séparation de fragments d’ADN sur gel d’agarose, culture de bactéries.
La  SNAP sera purifiée par chromatographie d’affinité et analysée sur gel d’acrylamide par la méthode SDS-PAGE. Elle sera identifiée par des anticorps spécifiques (techniques de Western blot et d’ELISA).

Concepts clefs et difficultés attendues :
Distinguer techniques acides nucléiques et techniques protéines.
Distinguer séquence codante des autres.
Distinguer vecteurs d’expression et vecteurs de clonage.
Organisation d’un plasmide et étapes d’un sous-clonage : à reconstituer à partir d’éléments épars dans le TP
Bonnes pratiques en biologie : importance des contrôles positifs et négatifs (ex digestion ER)
Sécurité des personnes et de l’environnement.

Evaluation :

Elle se fera sur : le compte-rendu de TP par binôme (résultats des expériences, commentaires, présentation) la participation individuelle au travail en groupe

Le manuel de TP est divisé en deux parties : la première explique le déroulement des expériences (bio1-5), la deuxième donne les explications nécessaires à chaque type d’expérience (p.14).

Nota : les éléments soulignés servent à la préparation du TP et sont donc réalisés par les enseignants.
Organisation du TP

Date
TP
groupe

vendredi 24.10
BIO1
groupe2

vendredi 7.11
BIO1
groupe1

vendredi 14.11
BIO2
groupe1

mardi 18.11

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