IDENTIFICATION DES DIFFERENTS PIGMENTS DE VEGETAUX CHLOROPHYLLIENS PAR CHROMATOGRAPHIE ET DETERMINATION DE LEUR LONGUEUR D'ONDE ABSORBEE.
1- Chromatographie_
La chromatographie est un procédé qui permet de séparer différents éléments chimiques, ceci grâce à un papier adapté et à un solvant. Le solvant va remonter à travers le papier, entraînant avec lui les différents pigments de la substance, déposés au préalable à la base de la languette. En remontant avec le solvant les pigments vont se séparer, ils seront visibles à différentes hauteurs sur le papier. Ici on analyse la chlorophylle brute, pour cela on écrase à l'aide d'un agitateur une feuille d'épinard de façon à former une tache verte à 1 cm de l'extrémité de la languette. Puis on place la languette dans un tube prévu à cet effet avec 5 mm de solvant à sa base. On laisse reposer 45 minutes. Après ce lapse de temps on observe les résultats, on peut y voir 4 taches correspondantes aux quatre pigments composant la chlorophylle brute : la chlorophylle A, la chlorophylle B, les xanthophylles, et enfin les caroténoides. On peut conclure que la chlorophylle est un mélange de pigments. Elle contient des pigments verts clairs, verts foncés, jaunes pales et oranges. Le tout assemblé forme la couleur verte prononcée de la chlorophylle. Mais la proportion peut varier, par exemple en automne, la concentration en caroténoides et en xanthophylles est plus importante.

2- Spectre d'absorption de la chlorophylle brute_

On extrait la chlorophylle brute. Pour cela on broie des feuilles d'épinards dans un mortier avec un peu de sable et 40 ml d'alcool à 90°. On filtre la préparation obtenue. On place une cuve de ce mélange, préalablement dilué dans le spectrophotomètre et on observe le spectre d'absorption. On remarque que le spectre d'absorption de la chlorophylle brute superpose les spectres d'absorption de chaque pigment. Une solution de plusieurs pigments possède un spectre d'absorption composé de chaque spectre