Analyschim/chromato/tp-hplc-cafeine-vextintajdoses.odt JF Perrin 2000-2011 page 1/3

Dosage de la caféine dans un soda-cola par HPLC
La technique utilisée est la Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC). La phase stationnaire est constituée de grains d’une silice greffée d’un motif hydrocarboné apolaire en C18
(polarité de phase inversée). La phase mobile est un mélange polaire méthanol/eau utilisé en élution isocratique ou gradient. L'éluat est suivi en continu par spectrophotométrie à 272 nm. Le dosage est possible par la méthode de l'étalonnage externe, par la méthode des ajouts dosés, après extraction liquide/liquide et utilisation d'un étalon interne.
C1. Préalable
Il s'agit essentiellement de justifier le réglage du détecteur de sortie de colonne HPLC, un spectrophotomètre en ligne réglé sur 272 nm.
On propose le spectre d'une solution étalon de caféine à 0,02 g/L en solvant méthanol/eau
4/60 (v/v), contre le solvant, dans l’intervalle 230 nm – 400 nm.
On propose aussi le spectre d’absorption du soda-cola fourni dilué au 1/10 en solvant méthanol/eau 4/60 (v/v), contre le solvant, dans l’intervalle 230 nm – 400 nm.

Discussion : spectres annotés.
C2. Réactifs et conditions opératoires générales pour les chromatographies
• Méthanol et eau pour réaliser la phase mobile.
• Injecteur à boucle d'injection de 20 µL équipé d’un filtre 0,45 µm.
• Colonne de silice greffée en C18 (de 15 cm de longueur et de 0,4 cm de diamètre) avec précolonne de protection ; débit à 0,5 mL/min.
• Détecteur spectrophotométrique à lecture continue réglé à 272 nm. Enregistreur-intégrateur à atténuation réglable et vitesse du papier d’enregistrement réglable.
• Coca-cola® et coca-cola® décaféïné, ‘café’ et ‘café décaféiné’ à partir de café moulu commercial. • Solution étalon de caféine à 0,2 g/L dans du méthanol qualité HPLC, à filtrer et à dégazer.
Utilisation de la chaîne HPLC disponible
L’appareil proposé réalise les gradients. L'appareil proposé