TP n°1 : Détermination du pH optimum d’action d’une enzyme
Titre :
Détermination du pH optimum pour l’enzyme α-amylase en étudiant la réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH
But :
Montrer et déterminer la valeur d’un pH optimum spécifique à l’enzyme α-amylase. Pour se faire on étudie son activité enzymatique par spectrophotométrie dans une réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH.
Calcul de concentration en amidon en mol/L : Ci × Vi = Cf × Vf Vi = ((1 × 100 × 10⁻⁶) )/25 = 4 × 10⁻⁶
4 μL à prélever pour une concentration 1g/L

[amidon] (mol/L) = ([amidon] (g/L) )/Mamidon = 1/4400 = 2,27 × 10⁻⁴mol/L

Courbe représentant l’absorance à 620nm du complexe Amidon-Iode en function de la concentration en amidon-Gamme etalon de l’amidon

Description de la courbe :
Droite représente la DO de l’amidon couplé à une solution d’iode en fonction de la concentration en mol par litre de l’amidon.
Droite croissante dont l’ordonnée à l’origine est égale à 0 : On peut donc appliquer à nos mesures la relation de Beer-Lambert. Le coefficient d’extinction molaire représente alors le coefficient directeur de la droite.

Réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH :
Tube 1 : Permet de déterminer le zéro du spectrophotomètre afin de ne pas fausser toutes les mesures suivantes : C’est un contrôle.
Tube 2 : Détermine l’absorbance de la solution d’amidon qui n’est pas hydrolysé, on soustrait la valeur de cette absorbance aux autres tubes qui contiennent de l’amidon et chacun a un pH qui varie pour obtenir seulement l’absorbance seulement l’absorbance et donc la concentration de l’amidon hydrolysé.

Calcul de V₀ :
On détermine grâce à la gamme étalon quelle concentration en amidon est présente à cette absorbance. Cette concentration en amidon hydrolysé est synthétisée au bout de 15 min. Pour retrouver la vitesse initiale, on