EXTRACTION D'ALBUMINE SERIQUE PAR CHROMATOGRAPHIE D'AFFINITE

Introduction
Le sérum représente la fraction du sang débarrassée des éléments figurés (cellules sanguines) et des facteurs de coagulation. Il est composé d'eau, d'électrolytes, et de protéines. Ces protéines sont représentées par : − les globulines: famille de protéines jouant un rôle de transport de certains éléments (principalement liposolubles), et d'immunité (anti-corps). − les albumines (les plus abondantes) sont des protéines d'environ 580 a.a jouant un rôle de transport, mais également dans le maintien de la pression oncotique (pression osmotique des protéines) et du maintien du pH (tampon).

But
Le but de cette manipulation est l'extraction de l'albumine du sérum par chromatographie d'affinité puis de la doser par spéctrophotométrie. Enfin nous contrôlerons la bonne séparation de l'albumine des autres protéines sériques par électrophorèse.

Principes
Plusieurs méthodes d'analyse et d'extraction ont été utilisées pour cette manipulation. Voici présenté le fonctionnement de ces différentes méthodes • Chromatographie d'affinité La chromatographie d'affinité permet l'adsorption spécifique d'une molécule que l'on cherche à séparer. Elle se présente sous forme d'une colonne dans laquelle un gel adsorbant a été inséré jouant le rôle de phase stationnaire (notons que d'autres phases stationnaires peuvent

être utilisées, des microbilles greffées par exemple) On utilisera des solutions différentes (par leur pH ou leur composition) comme phase mobile qui entraînera les molécules selon l'étape de cette chromatographie. Dans un premier temps un premier tampon passe dans la colonne permettant la fixation de la molécule d'intérêt au ligand contenu dans le gel (fig A) ainsi que l'élution des contaminants (2) Puis une nouvelle phase mobile est ajoutée permettant la dissociation molécule d'intérêt/ligant par variation de pH donc de charge de la molécule, ou par compétition.(3) Dans notre cas la