Fiche technique électrophorèse des protéines du blanc d'oeuf sur gel sebia

506 mots 3 pages
L’électrophorèse est l’une des principales techniques utilisées en biochimie ou biologie moléculaire pour la séparation des protéines ou celle des acides nucléiques. Dans un milieu donné, la séparation des particules se fait en fonction de leur charge électrique (déplacement d’ions sous effet d’un champ électrique) et pour des charges identiques, en fonction de leur taille.
Les molécules anioniques (-) migrent vers l'anode (+) et les molécules cationiques (+) se déplacent vers la cathode (-).

Vous effectuerez une dilution du blanc d'œuf au 1/2 dans du tampon d’électrophorèse (V final : 1 mL)
1- Poser le porte-applicateur à plat sur la paillasse et relever le chariot.
2- -Déposer 120 µL d’eau distillée sur le plateau dans le tiers inférieur du cadre prévu pour le gel.
3- Sortir le gel de son emballage
4- Eliminer rapidement l’excès de liquide en surface en déposant une feuille de papier filtre dessus (attention à ne pas laisser trop longtemps)
5- Placer le gel (face orientée vers le haut) sur le plateau contre le rebord du bas du porte-applicateur et dans le cadre dessiné.
6- Donner une forme concave au gel et le dérouler sur le plateau jusqu’au contact avec la goutte d’eau qui doit se répartir de façon uniforme sous toute la surface du gel.
7- Abaisser le chariot du porte applicateur jusqu’en position intermédiaire, la manette située sur le côté en position haute.
8- Poser un applicateur à plat sur la paillasse, numéro des puits vers le haut.
9- Déposer 10 µL de blanc d’œuf dilué par puits.
10- Eliminer la protection des dents de l’applicateur
11- Placer l’applicateur dans la position adéquate (1 à 12) au niveau du gel pour faire votre dépôt. (numéros vers l’opérateur)
12- Abaisser le chariot du porte applicateur jusqu’en butée à l’aide de la manette pour amener les dents de l’applicateur au contact du gel. Ne pas appuyer !
13- Après 40 sec, remonter l’applicateur et le jeter.
14- Placer le gel dans la cuve d’électrophorèse dans les encoches,

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