Hplc

3409 mots 14 pages

Section 2 item 5

CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE - HPLC
Introduction 1 Appareillage
1.1 Réservoir de PM 1.2 Pompe 1.3 Dispositif d’injection 1.4 Les colonnes 1.5 La phase stationnaire 1.6 Les détecteurs 1/Spectrophotométrique +++ 2/Fluorimétrique 3/Réfractometre 4/Condutimètre 5/Electrochimique 6/SM

2 Différents types de chromatographie liquide
2.1 Chromatographie d’adsorption (S/L) 2.2 Chromatographie de partage (L/L) +++ En phase normale En phase inversée 2.3 Chromatographie par échanges d’ion 2.4 Chromatographie par appariements d’ions ou paire d’ions 2.5 Chromatographie d’exclusion-diffusion 2.6 Chromatographie d’affinité

3 Choix d’une méthode chromatographique

Pharmaetudes

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1 Appareillage
Ø 2 grands type d’appareillage : o La chromatographie « Classique » : § Granulométrie > 10µm § Appareillage simple :Tube en verre avec plaque en verre fritté à la base ou tampon de coton § substances descendent le long de la colonne selon affinité § recueil de l’éluat par petites fractions § Mais : ü peu sensible ü long ü peu d’analyse de trace ou dosage o La chromatographie haute performance (HPLC) § Granulométrie entre 2-10 µm § Meilleure efficacité et résolution § Très utilisé +++

Ø

Structure générale d’un HPLC :

A : réservoir de PM B : Vanne électro magnétique de mélange des PM C : Pompe D : Egaliseur de pression E : Chambre de mélange F : Injecteur G : colonne H : Unité HPLC I : Détecteur J : Interface PC

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1.1 Réservoir de PM
Ø Ø Ø Flacon étanche (1 à 2L) Parfois fois munis d’un syst de dégazage (évite bulles d’air) Différents modes : o mode isocratique = PM de compo cte au cours l’extraction (analyse possible avec 1 seul réservoir) o mode programmation de solvant (+ cplxe) =gradient de polarité (nécessite pls réservoirs)

NB : les appareils pouvant travailler en prog peuvent travailler en isocratique mais ce n’est pas réciproque

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