Introduction :
Les rhizobiums, ou rhizobia, sont des bactéries aérobies du sol appartenant à la famille des Rhizobiaceae. Ces bactéries sont capables d’établir une symbiose fixatrice d’azote avec des plantes de la famille des légumineuses. Cette symbiose se traduit par la formation sur les racines de la plante hôte des nodules (nodosités).
But de TP : ✓ Isoler les rhizobiums partir de Medicago et les identifier par coloration de gram.
Matériel utilisé : • Racines nodulées de la luzerne annuelle Medicago truncatula. • Boites de Petri contenant le milieu YMA + Rouge Congo • Plaques en verre stériles. • Tubes stériles. • Pinces stériles. • Scalpels stériles. • Anse de platine. • Etuve à 28° C. • Bec Bunsen • Microscope • Lames
Produits utilisé : • Ethanol à 95%. • Solution d’hypochlorite de Calcium à 5 %. • solution de Fushine. • Eau distillée stérile. • Violet de Gentiane. • Lugol • Huile d’immersion.
Mode opératoire : ➢ Isolement des bactéries :
-Stériliser les nodules par l’éthanol à 95% pendant 3à 10seconde .
- Transférer les nodules dans du calcium hypochlorite à 5% pendant 3 minutes.
- Rincer les nodules à l’eau distillée stérile (10 fois).
- Déposer 2 à 3 gouttes d’eau distillées stérile sur une plaque en verre stérile.
-Dans chaque goutte, déposer un nodule stérile et en utilisant une pince stérile, écraser le nodule.
-Prélever la suspension de nodule a l’aide d’une anse de platine.
-Ensemencer la boite de Petri contenant le milieu YMA + Rouge Congo.
- Incuber à 28° C pendant 72 h.
L’ensemencement est réalisé selon la méthode des quatre cadrons (voir figure ci-dessous).
[pic]
Ensemencement par la technique des quatre cadrons

NB : toutes ces manipulations doivent de faire devant le bec bunsen
Résultats obtenus :
Après 72h d’incubation on a rien obtenu, donc notre objectif a échoué pour les raisons suivantes :
-Soit on a pris une quantité