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La technique ELISA
Histoire:

La technique d'ELISA a été conceptualisée et développée par 2 scientifiques suédois, Peter Perlmann (investigateur principal) et Eva Engvall à l'Université de Stockholm en 1971.

A la fin des années 60, Stratis Avrameas et GB Pierce mettent au point la technique d'immunoenzymologie, technique d'analyse par réaction entre antigènes et anticorps et utilisant comme marqueur des enzymes.

Principe:
La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une technique immuno-enzymatique de détection qui permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à l'anticorps.

Avantages de la technique: * L'utilisation d'anticorps monoclonaux rend la détection spécifique. * Possibilité de quantifier grâce à la réalisation d'une gamme en parallèle. * L'utilisation d'anticorps secondaires rend la technique sensible. * technique accessible à tous les biologistes. * La détection du signal ne nécessite pas la présence d'appareillage spécialisé. * La validité des trousses est d'environ 1 an.
Inconvénients de la technique: * La limite de détection est moins bonne que la technique RIA. * La réaction enzymatique rend cette technique dépendante de la température, du pH et de l'éclairement.
Le test ELISA indirect:
Ce test permet de détecter ou doser des anticorps. il se réalise en 4 étapes:
La première étape appelée "coating" de l'antigène:
Elle consiste à incuber dans des puits, la solution d'antigène spécifique de l'anticorps recherché . La fixation de l'antigène sur le fond des puits se fait électrostatiquement. Les plaques sont incubées à 4°C pendant une nuit. Les puits sont ensuite lavés pour éliminer les antigènes en excès avec du tampon de lavage.

La deuxième étape consiste à fixer l'anticorps à doser:
On incube à 37°C dans les puits, la solution d'anticorps à doser pendant