HYBRIDATION MOLÉCULAIRE
(SOUTHERN BLOT-NORTHERN BLOT)

Plan
• Introduction
• Hybridation

• Les différents types d’hybridation
Hybridation en phase liquide
Hybridation sur support solide
Hybridation in situ (HIS)
• Hybridation de type Southern

• Hybridation de type Northern
• Conclusion

introduction
Longtemps considérées comme essentiellement intéressantes à titre rétrospectif et épidémiologique, les méthodes de diagnostic virologique se sont considérablement diversifiées et raccourcies au cours des dernières années.
Souvent le recours

à la biologie est indispensable pour avoir un

diagnostic, notamment lors d’une infection sévère (encéphalite), une infection survenant sur un terrain immunodéprimé (fièvre chez un

transplanté), ou même pour confirmer l’origine virale d’une infection justiciable d’un traitement.

• Tous les développements qu’on voit aujourd’hui ont été rendus possibles grâce à plusieurs révolutions technologiques, notamment l’essor des techniques de virologie moléculaire, l’automatisation et la miniaturisation des tests sérologiques...
• La virologie moléculaire a pris une place de choix dans l’arsenal des méthodes de diagnostic direct des infections virales. Hybridation
• La spécificité de l'hybridation dépend de plusieurs facteurs, notamment des conditions d'incubation de la sonde sur les filtres et des conditions des lavages subséquents.

• La température, la force ionique du tampon ainsi que la

présence de détergents ou d'agents bloquants affectent le degré de réassociation entre la sonde et la cible.

• Les solutions protéiques servent à prévenir l'attachement des sondes sur la surface du filtre non occupée par les molécules d'acides nucléiques.

• D'autres réactifs tels que le SDS, l'ARN ou l'ADN hétérologues ont pour fonction de diminuer l'hybridation aléatoire des

sondes

sur

des

séquences

non

complémentaires, ainsi que le bruit de fond dépendant de