1/ But :

Le but du TP est de déterminer la composition et la structure d’un diholoside B grâce à la spécificité d’action de glycosidases et de tester grâce a la liqueur de Feeling, la réduction éventuelle des sucres.

2/ Principe :

1) Principe de la chromatographie sur couche mince :

La chromatographie sur couche mince est une technique de séparation de constituants à partir d’un mélange.
Elle comprend deux phases : -Stationnaire : gel de silice qui est polaire -Mobile : un solvant (mélange acétone-eau) qui entraine les composés à migrer le long de la phase stationnaire.
Des dépôts sont réalisés sur la phase stationnaire que l’on plonge dans la phase mobile afin de provoquer une migration des dépôts s’effectuant par capillarité. Les constituants polaires migrent peu voir ne migrent pas, alors que les constituants apolaires migreront car ils sont entrainé par le solvant apolaire.
La distance de migration dépend de l’affinité que les constituants ont avec la phase stationnaire et la phase mobile.

2) principe du réactif de Fehling

La fonction du réactif de Fehling est de mettre en évidence la présence d’aldose et de sucres réducteurs.
En effet, la liqueur de Fehling est une solution contenant des ions cuivre, de couleur bleue en milieu basique. Cependant, en présence d’une substance réductrice et de la chaleur en milieu alcalin, la liqueur de Fehling donne un précipité rouge d’oxyde de cuivre due à la réaction de cuivre de la liqueur avec le groupement aldéhydique libre de l’ose.

R-CHO + 2Cu2+(aq) + 5HO-(aq) → RCOO- + Cu2O(s) + 3H2O

3) Principe des glycosidases

L’hydrolyse enzymatique par les glycosidases entraine la rupture de la liaison osidique.
Les glycosidases appartiennent à la famille des hydrolases qui catalysent la réaction de dégradation de la liaison osidique. On utilise une solution tampon afin de maintenir le ph à une valeur constante.

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