TP3 : Antibiogramme
a) Identification du gram de la bactérie
b) But et principe
Préparer sur lamelle une coloration des Grams à l’aide de plusieurs solution : du violet de gentiane, du lugol, de l’éthanol à 70% et de la fuchsine de ziehl. Cette manipulation a pour but de révéler le type de gram de l’échantillon à tester et de savoir si ces souches sont des bacilles ou des coccis grâce à une observation au microscope.
c) Résultats
Le test de coloration de Gram révèle une coloration rose. J’en conclue que le germe est à Gram (-). L’observation au microscope révèle par la forme des bactéries que la boîte de pétri contient des bacilles.
d) Méthode par les disques
a) But et principe
Après avoir préparé une suspension bactérienne d’opacité à 0,5 McFarland dans un tube à essai, on ensemence une boîte de Mueller Hinton à l’aide d’un écouvillon stérile. Puis on dépose six disques antibiotiques (Kanamycine, Pénicilline, acide fusidique, amoxicilline, nitrofurantoïne ou furadantine et érythromycine) sur le milieu gélosé. On laisse la boîte incuber pendant 24 heures.
e) Résultats Schéma de la boîte de Mueller Hinton.

Antibiotique
Diamètre en mm
Observation
Conclusion
Acide fusidique
0
< 3mm souche résistante
R
Kanamycine
24
> 17mm souche sensible
S
Pénicilline
10
Entre 3 et 23mm souche intermédiaire
I
Amoxicilline
25
> 21mm souche sensible
S
Nitrofurantoïne
20
> 17mm souche sensible
S
Erythromycine
15
< 17mm souche résistante
R
Par observation, je remarque que les antibiotiques ont des inhibitions indifférentes.
f) Méthode de la galerie ATB
a) But et principe
On réalise une suspension en ampoule NaCl medium de 2mL à 0,5 McFarland puis on en prélève 10µL que l’on verse dans l’ampoule ATB medium 2% de 7mL. On ensemence chaque cupules de la galerie ATB UR (car le germe est un Bacille à Gram négatif) avec 135µL de cette suspension. On laisse incuber pendant 24 heures.
g) Résultats
Les cupules témoins de la galerie présentent bien