Compte Rendu TP
ETUDE DE LA CHAÎNE RESPIRATOIRE

Principe

Le but de ce TP est d'étudier le fonctionnement de la chaîne respiratoire de mitochondries. Le foie étant un tissu particulièrement riche en mitochondrie, nous l'utiliserons pour cette étude. Pour comprendre le fonctionnement de la chaîne respiratoire, nous utiliserons un oxygraphe pour suivre l'évolution de la concentration en oxygène au cours du temps.
La chaîne respiratoire est localisée dans la membrane interne mitochondriale. Cette chaîne de transport d'électrons est constituée de quatre complexes enzymatiques : • complexe I : NADH déshydrogénase • complexe II : succinate déshydrogénase • complexe III : cytochrome b-c1 • complexe IV : cytochrome c oxydase.

La chaîne respiratoire permet de réoxyder les coenzymes NADH et Ubiquinone réduits au cours du cycle de Krebbs. Cette réoxydation s'accompagne de la création d'un gradient transmembranaire de protons qui va servir à fabriquer de l'ATP, molécule énergétique universelle.
Matériel et méthodes

• Préparation de la suspension mitochondriale
Dans ce TP, on utilise des mitochondries fraiches extraites à partir d'un rat récemment décapité. Après une série de centrifugation, on récupère le culot qu'on suspend dans un tampon.

• Manipulations
Pour ces expériences, on utilise un oxygraphe. Il s'agit d'un appareil de mesure qui utilise une électrode à dioxygène constituée par une cathode et une anode reliée par une solution conductrice. L'ensemble est séparé du milieu par une membrane imperméable à l'eau et aux ions mais perméable au dioxygène dissout. L'électrode est polarisée. On enregistre le courant électrique généré. L'intensité du courant est proportionnelle à la quantité d'oxygène dissoute dans le milieu. On peut ainsi suivre la consommation d'oxygène qui est l'accepteur final de la chaîne respiratoire. Grâce aux tracés obtenus nous pourrons calculer la pente et donc en déduire la vitesse de la réaction.

Dans ce TP, nous