UNIVERSITE DE NOUAKCHOTT FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE
ENZYMOLOGIE Troisième année Biologie et STA1

Elaboré par : Ali O. Med Salem O. BOUKHARY

2009-2010
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SOMMAIRE

Etude de l’activité de la b-fructofuranosidase (invertase) de la levure
TP 1. Extraction de l’invertase de la levure et étalonnage d’une solution standard de glucose + fructose pour la méthode a l’acide dinitrosalicylique (DNS) TP 2. Détermination de la vitesse initiale d’une réaction enzymatique TP 3. Détermination des constantes cinétiques KM et Vmax d’une réaction enzymatique TP 4. Etude de l’influence du pH et de la température sur une réaction enzymatique

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Extraction et étude de l’activité de la b-fructofuranosidase (invertase) de la levure
GENERALITES Le saccharose est le plus répandu des diholosides, Il est extrait de la betterave et de la 20 canne à sucre. C'est un sucre non réducteur dextrogyre ( [a ]D = +66,5° ) qui par hydrolyse chimique ou enzymatique, libère un mélange équimolaire de glucose et de fructose, tous deux 20 réducteurs. Leur pouvoir rotatoire global est lévogyre ( [a ]D = -20°) ). On donne ainsi à ce mélange le nom de sucre Inverti. (Inversion du pouvoir rotatoire). L'inverstase ou ß-fructofuranosidase est une hydrolase capable de scinder le saccharose en glucose et fructose par rupture des liaisons ß-fructofuranosiques. α-D-glucopyranosyl (1®2) ß-D-fructofuranoside (Saccharose) H2O Invertase

α-D-glucopyranose + ß-D-fructofuranose (Glucose) (Fructose) L'activité enzymatique de l’invertase peut être étudiée en dosant les sucres réducteurs libérés après hydrolyse par une des méthodes suivantes : - En mesurant la variation du pouvoir rotatoire en fonction du temps d'hydrolyse - La méthode au ferrocyanure de potassium - La méthode à la glucose-oxydase - Par réduction à la liqueur de Fehling - La méthode à l’acide 3,5-dinitrosalicylique ou DNS (c'est cette dernière que nous utiliserons) Pour une