Structure et fonctions des protéines 1
Purification de la thrombine

I . Résumé

La prothrombine est le précurseur de la thrombine, protéinase qui initie la dernière étape de la cascade de coagulation du sang par dégradation du fibrinogène en fibrine. Le but de ce tp est de tester la stabilité de la thrombine. Pour cela nous allons réaliser 2 étapes de purification de la prothrombine issue du plasma de sang de cheval. La première étape consiste à séparer la prothrombine du plasma. Cette dernière s’entoure d’ions baryum au détriment des molécules d’eau et devient insoluble. Il s’agit de la précipitation au BaCl2. La deuxième étape est une chromatographie échangeuse d’ions sur une colonne Diéthyl-amino-ethyl(DEAE)-Sephadex A-50 chargée positivement avec une élution de la prothrombine grâce un gradient de NaCl.
Un test enzymatique nous permettra de suivre spécifiquement cette activité.
II. Introduction
La prothrombine est une chaîne polypeptidique précurseur de la thrombine. La thrombine, dans l'organisme sain joue un rôle important en déclenchant la première phase de la cascade des réactions de coagulation. La thrombine agit comme une sérine-protéase qui convertit le fibrinogène soluble (protéine plasmatique fabriquée par les cellules du foie) en brins de fibrine insoluble qui contribuent à former le caillot sanguin, en jouant un rôle de catalyseur impliqué dans les réactions de coagulation. Si la thrombine était toujours présente dans le sang, elle provoquerait immédiatement un infarctus. Elle n'est normalement produite (à partir de la prothrombine) que là où il faut, et quand l'organisme en a besoin (blessure externes ou internes).
La thrombine induit également la prolifération des cellules musculaires lisses, des fibroblastes et des cellules endothéliales en induisant la production de facteurs de croissance tels que le fibroblast growth factor (FGF), le vascular endothelial growth factor (VEGF) et leurs récepteurs.
La thrombine possèdent des